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《人結(jié)直腸腫瘤cd47陽性細胞亞群免疫特性的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、人結(jié)直腸腫瘤CD47陽性細胞亞群免疫特性的研究馬麗君1劉婷1李海2李玉奎1（通訊作者）（1寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院干細胞研究所寧夏銀川750004）（2寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院結(jié)直腸外科寧夏銀川750004）【摘要】目的：從人結(jié)直腸腫瘤組織中分離培養(yǎng)CD47陽性腫瘤細胞并研究其免疫學特性。方法：無血清培養(yǎng)法對原代培養(yǎng)細胞進行篩選培養(yǎng)，采用有限稀釋法篩選分離具有連續(xù)克隆能力的單細胞，流式細胞儀分選出細胞表面標記CD47陽性的細胞亞群；分離正常人外周血T淋巴細胞經(jīng)PHA活化，實驗分為3組：①空白對照組，②與CD47陽性腫瘤細胞（1:10）共培養(yǎng)組，③抗CD47單克隆抗體組（lμ
2、g/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml）;MTT法檢測培養(yǎng)72h后各組T細胞的增殖水平，EUSA法測定各組細胞培養(yǎng)液中IL-12、IFN-γ、TNF-α的表達量。結(jié)果：三例原代培養(yǎng)的腫瘤細胞在無血清培養(yǎng)基中能夠形成腫瘤球并獲得可持續(xù)傳代的克隆細胞；能夠形成腫瘤球的原代培養(yǎng)細胞中CD47陽性細胞所占比例分別為99.8%,97.2%和99.9%；與活化的人T淋巴細胞共培養(yǎng)，加入（10μg/ml和20μg/ml）抗CD47單克隆抗體組比CD47陽性細胞組T細胞具有較強的增殖能力（P<0.05）,20&mu
3、;g/ml濃度組與10μg/ml濃度組比較無統(tǒng)計學差異（P〉0.05）;ELISA檢測CD47陽性細胞組培養(yǎng)液中IFN-γ含量較空白對照組明顯降低（P<0.05）,而IL-12、TNF-&alPha;的表達量與空白對照組比無明顯差異（P〉0.05）。結(jié)論：人結(jié)直腸腫瘤CD47陽性細胞亞群能抑制活化的T淋巴細胞增殖并抑制其釋放IFN-γ,為結(jié)直腸癌的靶向治療提供實驗依據(jù)?！疚墨I標識碼】A【關鍵詞】結(jié)直腸腫瘤；CD47；免疫逃逸【中圖分類號】R73-3【文章編號】2095-1752(2016)14-0060-03ImmunologicalCh
4、aracteristicsofCD47+TumorStemCellsinHumanColorectalCarcinomaMALi-junl,UU-Tingl,Ll-Hai2,LIYu-kuil,(1.NingxiaHumanStemCellInstitute,theGeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan,Ningxia750004,P.R.China;2.SurgicalDepartmentofColon,theGeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchu
5、an,Ningxia750004,P.R.China)【Abstract】ObjectiveToisolateCD47+coloncancercellsfromhumancolorectalcarcinomaandstudytheimmunologicalcharacteristicsinvitro.MethodsPrimarycolorectalcarcinomacellswereculturedinserumfreeconditionswhichgiverisepreferentiallytoself-renewalstemcellspheres.Theexpre
6、ssionofCD47wasanalyzedbyflowcytometry.PeripheralbloodTlymphocytesandCD47+cellswereco-culturedwiththeindicatedantibodiesthroughinvitroMTTassay.TheexpressionsofIL-12、IFN-γ、TNF-αineachgroupwereanalyzedbyELISAassay.ResultsThreeprimarycolorectalcarcinomacellsgrewintotumorspheres.
7、TheCD47expressionsofeachcloneare99.8%，97.2%and99.9%.TheproliferationofperipheralbloodTlymphocytesoftheexperimentalgroups(10and20μg/mL)increasedsignificantlycomparedwiththeCD47+tumorcellgroup(P<0.05).Statisticalanalysisshowedthatnosignificantdifferencewasfoundbetweenthetwogro
