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《當歸注射液預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心肌組織中survivin的表達 》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、當歸注射液預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷后心肌組織中Survivin的表達【摘要】目的：觀察當歸注射液對缺血再灌注損傷心肌細胞內(nèi)Survivin表達的變化，探討當歸抗心肌缺血再灌注損傷保護作用的機理。方法:將35只SD大鼠隨機分成4組:正常對照組(n=5)，假手術(shù)組(n=10)，缺血再灌注組(n=10)，當歸治療組(n=10),建立在體心肌缺血再灌注動物模型。實驗完畢后，將各組動物心肌組織做免疫組織化學染色；觀察各組動物心肌細胞內(nèi)Survivin表達的變化。利用HPIAS-2000圖像分析系統(tǒng)測定Survivin在以上各組中表達的平均光密度和平均陽性面積率。結(jié)果：正常對照組心肌細胞內(nèi)Survi
2、vin表達低呈陰性；當歸治療組心肌細胞內(nèi)Survivin表達較低呈陰性。假手術(shù)組心肌細胞內(nèi)Survivin表達也較低呈弱陽性，缺血再灌注損傷組Survivin表達較高呈陽性。圖像分析結(jié)果顯示：正常對照組、當歸治療組、假手術(shù)組與缺血再灌注損傷組之間Survivin表達的平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義(P0.01)；正常對照組與假手術(shù)組之間、當歸治療組與假手術(shù)組之間Survivin表達的平均光密度及陽性面積率的差異無顯著性意義(P>005)。結(jié)論：當歸注射液對大鼠缺血再灌注損傷心肌細胞有重要的保護作用?！娟P(guān)鍵詞】當歸注射液；缺血再灌注；心??；Survivin當歸含有阿魏酸、多種磷脂
3、、人體必需氨基酸和微量元素等。目前已證明,當歸對心血管系統(tǒng)、血液造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、抗氧化和清除自由基等多方面均有肯定的藥理作用〔1〕。目前在研究藥物治療心肌缺血方面還沒有任何一種能絕對減少心肌梗死,對抗心肌缺血。當歸是活血養(yǎng)血的傳統(tǒng)中藥,具有清除氧自由基、降低膽固醇、抗血栓形成等作用,臨床用于治療高血壓病、缺血性心臟病。目前在研究藥物治療心肌缺血方面還沒有任何一種能絕對減少心肌梗死,對抗心肌缺血〔2〕。當歸是活血養(yǎng)血的傳統(tǒng)中藥,具有清除氧自由基、降低膽固醇、抗血栓形成等作用,臨床用于治療高血壓病、缺血性心臟病〔3〕。本實驗觀察當歸注射液對缺血/再灌注過程心肌的保護作用,研究當歸注射液抗心肌缺
4、血/再灌注損傷的作用機理。旨在指導臨床合理應用當歸治療心血管疾病,開辟當歸在體外循環(huán)手術(shù)前和術(shù)中應用的新途徑。Survivin是近年發(fā)現(xiàn)的細胞凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosisprotein，IAP）家族的一個新成員，它主要表達于發(fā)育中的胚胎組織以及人類常見的惡性腫瘤組織，而在人類分化成熟組織中不表達（胸腺除外）〔4〕。Survivin蛋白表達的特異性〔5〕，有望成為腫瘤診斷和治療的新靶點。以往的研究表明：Survivin與腫瘤細胞增殖、凋亡、血管生成有關(guān)，但是Survivin在心肌缺血/再灌注損傷中的抗凋亡機制未見報道。本實驗采用免疫組織化學方法觀察當歸注射液對缺血/再灌
5、注過程心肌的保護作用,研究當歸注射液抗心肌缺血/再灌注損傷的作用機理。旨在指導臨床合理應用當歸治療心血管疾病,開辟當歸在體外循環(huán)手術(shù)前和術(shù)中應用的新途徑。1材料與方法1.1材料1.1.1動物模型制備及分組選用健康雄性g·(100g)-1,麻醉動物后行氣管切開接微型呼吸機人工呼吸〔呼吸頻率60次·min-1,潮氣量2ml·(100g)-1〕,沿胸骨左緣第4肋骨開胸在左心室、右心室與左心房交界處結(jié)扎/開放左冠狀動脈前降支建立心肌缺血再灌注模型。將動物隨機分成4組:正常對照組（不做任何處理）；假手術(shù)組（絲線穿過冠狀動脈前降支但不結(jié)扎）；缺血再灌注損傷組(IR)（缺血/再灌注前靜脈注射生理鹽水0.8m
6、l/kg，結(jié)扎左冠狀動脈前降支45min,再灌注120min）；當歸注射液預處理組（在結(jié)扎前20min，靜脈注射當歸注射液0.8ml/kg,其它處理同缺血/再灌注組）。1.2主要試劑25%當歸注射液為武漢大學中南醫(yī)院制藥廠提供；即用型兔抗鼠Survivin單克隆抗體，即用型S-P通用型免疫組織化學試劑盒，DAB顯色試劑盒及多聚賴氨酸，以上試劑均購于北京中杉生物技術(shù)有限公司。1.3方法1.3.1常規(guī)HE染色取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。1.3.2免疫組織化學S-P法檢測Survivin相關(guān)抗原主要步驟：5μm組織切片常規(guī)脫蠟至水，3%過氧化氫處理10min以抑制內(nèi)源性過氧化物酶
7、活性，Survivin均采用高壓抗原修復，正常羊血清處理10min以減少非特異性背景，一抗4℃孵育過夜，生物素標記的二抗處理10min，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶復合物處理10min，DAB顯色液顯色，自來水沖洗終止反應，蘇木精復染，脫水，透明，封片。用PBS代替一抗作為陰性對照組，人乳腺癌作為Survivin的陽性對照組。1.4免疫組織化學結(jié)果判斷Survivin以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反
