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《組蛋白去乙?；敢种苿δX缺血保護(hù)作用的機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、組蛋白去乙?；敢种苿δX缺血保護(hù)作用的機(jī)制研究目的：本研光分別采用體外缺氣/缺糖(oxygen-glucosedeprivation，OGD)損傷和體內(nèi)小鼠短暫性大腦中動脈缺血(transientmiddlecerebralocclusion,tMCAO)再灌注損傷兩種模型，初步探W纟11蛋白去乙?；敢种苿?histonedcacctylascinhibitor,HDACi)對缺血性腦卒屮的保護(hù)作用及其相關(guān)保護(hù)機(jī)制，為臨床應(yīng)用HDACi治療腦缺血性疾病奠定理論慕礎(chǔ)。方法：1、采用化學(xué)方法建立SH-SY5Y細(xì)胞
2、不同時(shí)間持續(xù)性O(shè)GD損傷模型，MTT法檢測細(xì)胞活性，以評佔(zhàn)持續(xù)性O(shè)GD損傷對SH-SY5Y細(xì)胞的損傷程度。繼而觀察HDACi對OGD誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷的影響，實(shí)驗(yàn)指標(biāo)如下：倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，MTT檢測HDACi對細(xì)胞活性的影響，Propidiumiodide(PI)和Hocchst33258染色檢測細(xì)胞凋亡與壞死情況，乳酸脫氫酶(LDH)法檢測細(xì)胞損傷，熒光顯微鏡檢測各組細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)含量和線粒體膜電位(mitochondrionmembranepot
3、ential,MMP)的變化，Westernblot檢測各組細(xì)胞乙?；降淖兓?。2、健康雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分力2組:偽手術(shù)(Sham)組、I/R組。I/R組按照Zea-Longa線栓法逮立小氣左側(cè)大腦中動脈缺血30min后再灌注損傷模型。Sham組的手術(shù)操作步驟同I/R組，但是不進(jìn)行大腦中動脈栓塞。I/R組分為三個(gè)亞組：I/R24h組、I/R48h組、I/R72h組。于再灌注24h后進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評分，之后處死取材，分別進(jìn)行TTC染色測量腦梗死體積。3、健康雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為4組：Sham組、
4、I/R組、SAHA組、溶劑對照組(DMSO)。I/R組按照改良Zea-Longa線栓法建立小鼠左側(cè)大腦中動脈缺血30min后再灌注48h損傷模型。Sham組的手術(shù)操作步驟同I/R組，但是不進(jìn)行大腦中動脈栓塞。SAHA組分為三個(gè)亞組，分別在大腦中動脈栓塞成功后立即腹腔注射不同齊IJ量的SAHA:SAHA1組-注射SAHA12.5mg/Kg;SAHA2組-注射SAHA25mg/Kg；SAHA3組-注射SAHA50mg/Kg。DMSO組：大腦中動脈栓塞成功后立即腹腔注射l%DMS01ml。于再灌注24h后進(jìn)行神經(jīng)功能缺
5、陷評分，再灌注48h后處死取材，分別進(jìn)行TTC染色測量腦梗死體積以及Westernblot檢測腦組織蛋白的乙?；阶兓闆r。結(jié)果：1、OGD損傷2h，模型組的細(xì)胞活性和乙?；捷^對照組顯著降低，并隨OGD時(shí)間的延長而變化越顯著。MMP水平較對照組顯著降低，而ROS含:W:較對照組顯著升尚,Hoechst和PI雙染檢測也發(fā)現(xiàn)染色質(zhì)凝聚，核碎裂，凋亡小體產(chǎn)生，并隨OGD時(shí)間的延長，凋亡和壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。與模型組相比，TSA和SAHA均能明顯提高OGD誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷的活性，改善細(xì)胞形態(tài)。此外，O.SgmoLl
6、/SAHA可明敁減少OGD引起的神經(jīng)元凋亡和壞死數(shù)量，減輕細(xì)胞LDH釋放，降低細(xì)胞閃ROS含量，以及提高M(jìn)MP和乙?；?。2、神經(jīng)功能缺陷評分顯示，與Sham組相比較，I/R組出現(xiàn)程度不同的神經(jīng)生物學(xué)缺陷，神經(jīng)功能缺陷評分為(2.60±0.15)分，Sham組無神經(jīng)功能缺陷。TTC染色顯示缺血再灌注組小鼠有明顯的梗死灶，Sham組則無，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、祌經(jīng)功能缺陷評分和腦梗死體積：與Sham組相比較，SAHA組和I/R組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)生物學(xué)缺陷，神經(jīng)功能缺陷評分在1-3分之間，Sham組無神經(jīng)功能缺
7、陷。與DMSO組相比較，SAHA12.5mg/Kg組無明S改善小鼠的祌經(jīng)功能缺損評分，與I/R組無明顯差異。雖然腦梗死體積有所減少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SAHA25mg/Kg和50mg/Kg組均可降低神經(jīng)功能缺陷評分，顯著減少腦梗死體積，與I/R組相比較，分別減少腦梗死體積42.92%和56.53%。SAHA25mg/Kg組和50mg/Kg組比較無顯著差異。Westernblot結(jié)果顯示，與Sham組相比較，1/R組小鼠缺血側(cè)大腦的乙?；斤@著下降。SAHA在腹腔注射6h可顯著升高正常小鼠腦蛋白的乙?；?p
8、<0.05),24h后與Control組無顯著差異。SAHA25mg/Kg和50mg/Kg可顯著抑制腦缺血誘導(dǎo)的乙酰化水平下降。結(jié)論：1、HDACi對OGD誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞缺氧/缺糖損傷具有明顯的保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能與降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平及維持MMP的高能狀態(tài)有關(guān)。2、改良線栓法是一種簡單、可靠的制作小鼠短暫性MCAO模型的方法，MCAO30min再灌注48h可
