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1、腸功能恢復(fù)湯對(duì)腸缺血【摘要】 目的觀察腸功能恢復(fù)湯對(duì)腸缺血-再灌注損傷大鼠腸黏膜屏障的影響,探索多器官功能障礙綜合征的新的防治途徑。方法SD大鼠45只,隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組、腸缺血-再灌注損傷模型組、腸功能恢復(fù)湯治療組,分別檢測各組血清中二胺氧化酶(DAO)和D-乳酸含量,收集小腸灌洗液并測定灌洗液中的溶菌酶含量,同時(shí)取腸系膜靜脈血、腸系膜淋巴結(jié)、肝及脾組織進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),觀察細(xì)菌移位情況,取回腸組織制成石蠟切片,HE染色光鏡下觀察,測量小腸黏膜厚度、絨毛高度和隱窩深度,取回腸組織制成電鏡標(biāo)本,透射電
2、鏡觀察。結(jié)果腸功能恢復(fù)湯組與模型組相比,血清中DAO和D-乳酸含量均顯著降低(P<0.01),小腸灌洗液中溶菌酶含量顯著升高(P<0.01),細(xì)菌移位率顯著降低(P<0.01)。腸功能恢復(fù)湯組小腸黏膜的病理形態(tài)明顯好于模型組。結(jié)論腸功能恢復(fù)湯對(duì)腸缺血-再灌注損傷大鼠的腸黏膜屏障具有保護(hù)作用?!娟P(guān)鍵詞】腸功能恢復(fù)湯腸缺血-再灌注損傷腸黏膜屏障 ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectofthedecoctiontohelprecoverintest
3、inalfunctionontheintestinalmucosalbarrierofratsia-reperfusioninjury.MethodsForty-fiveSDratsly:controlgroup,gutischemia-reperfusioninjurygroupanddecoctiongroup.ODS)發(fā)生的始動(dòng)器官[1-2]。腸缺血-再灌注損傷是腸黏膜屏障破壞的基本因素之一。腸功能恢復(fù)湯由大黃、丹參等10余味中藥組成,具有促進(jìn)腸蠕動(dòng),促進(jìn)術(shù)后腸功能恢復(fù)及腸道營養(yǎng)吸收等作用,其對(duì)腸道
4、黏膜屏障是否具有保護(hù)作用,目前尚未見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過觀察腸功能恢復(fù)湯對(duì)腸缺血-再灌注損傷大鼠腸黏膜屏障的影響,探索MODS新的防治途徑。 1材料與方法 1.1材料 SD大鼠45只,SPF級(jí),雌雄不限,體重(248.3±16.3)g,由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。T6型新世紀(jì)紫外光分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);超速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);RM2025型組織切片機(jī)(德國LEICA公司);Olympus光學(xué)顯微鏡(日本);H-600型透射電鏡(日本日立公司);VIDAS-21
5、型自動(dòng)圖像分析儀(德國OPTON);DAO標(biāo)準(zhǔn)品、鄰聯(lián)二茵香胺購自美國Sigma公司;D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品、D-乳酸脫氫酶購自南京凱基生物發(fā)展有限公司;溶菌酶購自中科院生物物理所生化廠,溶壁微球菌由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)與病原生物學(xué)系提供?! ∧c功能恢復(fù)湯:大黃20g(后下)、丹參12g、黨參15g、白術(shù)15g、陳皮15g、木香12g、桃仁12g、赤芍15g、火麻仁30g、枳實(shí)12g等組成,由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥制劑科提供,濃縮煎制成濃度為1∶1藥液(含生藥1g/mL),滅菌處理后4℃冰箱內(nèi)保存
6、。 1.2腸缺血-再灌注損傷動(dòng)物模型[3]的建立 大鼠于造模前24h禁食,自由飲水。稱重后給予腹腔注射100mL/L水合氯醛(30mg/100g)麻醉,實(shí)驗(yàn)臺(tái)上仰臥固定,腹部脫毛后常規(guī)消毒鋪無菌巾,取腹部正中切口進(jìn)腹,暴露腸系膜上動(dòng)脈(superiormesentericartery,SMA),各組分別用無創(chuàng)夾夾閉其根部45min,松夾即為再灌注?! ?.3動(dòng)物分組 45只大鼠隨機(jī)分為3組,正常對(duì)照組(controlgroup)15只:正常大鼠生理鹽水灌胃;腸缺血-再灌注損傷模型組(I/Rgroup
7、)15只:造模后,生理鹽水灌胃;腸功能恢復(fù)湯治療組(decoctiongroup)15只:造模后即給予腸功能恢復(fù)湯灌胃;均為1mL/100g,2次/日,連續(xù)2日?! ?.4血清二胺氧化酶(DAO)和D-乳酸含量的測定 各組動(dòng)物于造模成功48h后,用100mL/L水合氯醛(30mg/100g)麻醉,嚴(yán)格無菌操作下采取門靜脈血,采用黎君友等[4]的分光光度法測定血清DAO活性;采用Brandt等[5]的分光光度法測定血清D-乳酸含量,均嚴(yán)格按說明書操作?! ?.5小腸灌洗液中溶菌酶含量的測定 麻醉后立即剖
8、腹切取從屈氏韌帶到距回盲部5cm處的腸管,用生理鹽水洗去漿膜上的污物,然后以100mL/L乙酸50mL灌洗小腸,將小腸灌洗液在4℃,5000r/min,離心30min,收集上清液裝入透析袋,透析18h除去乙酸以及其他小分子物質(zhì),然后冷凍干燥,得到小腸灌洗液乙酸溶解物,用瓊脂平板擴(kuò)散法測其溶菌酶的含量?! ?.6細(xì)菌培養(yǎng) 麻醉后,無菌條件下打開腹腔,分別取腸系膜淋巴結(jié)(mesentericlymphnode,MLN)、肝及脾組