脂多糖對人工關(guān)節(jié)磨屑誘導(dǎo)的骨溶解的影響

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1、脂多糖對人工關(guān)節(jié)磨屑誘導(dǎo)的骨溶解的影響：段鋼朱自強(qiáng)陳宏亮戈兵【摘要】目的探討脂多糖(LPS)促進(jìn)人工關(guān)節(jié)松動的可能性。方法采集30例人體外周血,分離單核細(xì)胞(MOs)，分組培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分4組（n=30）：A組(對照組)僅加入MOs;B組加入MOs+LPS（100μg/L），C組加入MOs+超高分子聚乙烯微粒(UHMOs+UHMOs分泌TNF-α、IL-6，效果與UHMethods30samplesofperipheralbloodhealthyhumandonors.Monocytes(MOs)ole

2、cularmunoassay.ResultsThelevelsofTNF-αandIL-6uchhigheringroupDthanintheother3groups.ThereulatesMOstosecreteTNF-αandIL-6.LPSisnotonlysimilartoUHMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液(GBCO公司),聚蔗糖-泛影葡胺分層液(FICOLL,上海試劑廠，滬Q/HG22222043289),小牛血清(特級,杭州四季青公司),六孔培養(yǎng)板(GBCO公司),TNF-αELISA試劑盒(解

3、放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所,最小檢測濃度＜0.3μg/L),IL-6ELISA試劑盒(RD公司)?！　?.2樣本采集　　隨機(jī)選擇健康獻(xiàn)血者30例,其中男18例,女12例,年齡40～70歲,平均52.6歲。每例受試者采集外周血10ml,肝素抗凝?！　?.3實(shí)驗(yàn)方法和分組　　采集的外周血以Hank液稀釋1倍,分層液梯度離心法分離出MOs。洗滌3次,加含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液,細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞濃度至4×108/L,錐蟲藍(lán)排除法檢測細(xì)胞活力均大于95%。向培養(yǎng)板中滴加細(xì)胞

4、懸液,每孔加3ml。置37℃、5%CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h,使細(xì)胞貼壁,利用MOs的貼壁性洗去非貼壁細(xì)胞,留下MOs。每板第1孔加入含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液3ml,于第2孔中加入100μg/L的LPS懸液3ml,余2孔中加入濃度為1012/L的UHMOs的空白對照組(A組),第2孔為MOs+LPS100μg/L(B組),第3孔為MOs+UHMOs+UHMOs分泌TNF-α、IL-6，效果相似；D組TNF-α、IL-6含量均明顯高于B、C組(P＜0.05)，說明LPS具有促進(jìn)UHM

5、Os分泌TNF-α、IL-6的作用，增強(qiáng)了溶骨效應(yīng)。表1不同處理組TNF-α、IL-6的含量(略)　　3討論人工關(guān)節(jié)置換術(shù)是治療嚴(yán)重關(guān)節(jié)疾患的有效方法之一。但是，隨著人工關(guān)節(jié)置換數(shù)量的增加以及人工關(guān)節(jié)使用年限的延長，人工關(guān)節(jié)的無菌性松動成為影響其遠(yuǎn)期療效的主要原因。超過66%的髖關(guān)節(jié)翻修和近50%的膝關(guān)節(jié)翻修由人工關(guān)節(jié)無菌性松動引起［4］。目前多數(shù)研究認(rèn)為各種磨損碎屑活化假體周圍界膜中的巨噬細(xì)胞、異物巨細(xì)胞等細(xì)胞釋放IL-6、IL-1及TNF-α等骨吸收因子，溶骨性因子直接或間接地激活破骨細(xì)胞，從而

6、引起假體周圍骨吸收、骨溶解，后者又可加重磨損，產(chǎn)生更多的微粒，形成惡性循環(huán)，使假體周圍支撐骨量丟失，最終導(dǎo)致人工關(guān)節(jié)的無菌性松動?！　≡谏镄砸蛩胤矫?磨損顆粒是無菌性松動發(fā)生的關(guān)鍵性因素［2］。然而，隨著對無菌性松動的生物學(xué)機(jī)制研究的逐漸深入,LPS在加速人工關(guān)節(jié)的無菌性松動方面的作用逐漸引起重視。LPS是革蘭陰性細(xì)菌所共有的細(xì)胞膜成分，具有與磨損顆粒相似的生物學(xué)作用，可刺激細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、IL-1、IL-6［5］，這些因子正是導(dǎo)致了人工關(guān)節(jié)無菌性松動的主要原因,并且LPS易黏附于多種人工假體

7、材料及其磨損顆粒，如鈦、鈦合金、聚乙烯等［3，6～8］。Tatro等［9］發(fā)現(xiàn)在UHMOs、UHMOs分泌溶骨因子TNF-α、IL-6；B、C組之間TNF-α和IL-6含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示在一定的劑量范圍內(nèi)LPS刺激MOs分泌溶骨性因子TNF-α、IL-6的作用與UHMOs分泌TNF-α、IL-6的作用，二者具有協(xié)同作用，增強(qiáng)了溶骨效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦提示LPS具有促進(jìn)UHMJ,HastyKA,etal.AccumulationofLPSbypolyethyleneparticl

8、esdecreasesboneattachmenttoimplants［J］.JOrthopRes,2006,24(5):959-996.　?。?］SundfeldtM,CarlssonLV,JohanssonCB,etal.Asepticloosening,notonlyaquestionofSJ,etal.LipopolysaccharidefromPrevotellanigrescensstimulatesosteoclastogenesisincocultur