健脾活血方對2型糖尿病胰島素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖

《健脾活血方對2型糖尿病胰島素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、健脾活血方對2型糖尿病胰島素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖【摘要】目的探討健脾活血方對2型糖尿病胰島素抵抗(InsulinResistance,IR)大鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4(GlucoseTransporter-4,GLUT-4)mRNA表達(dá)的的改善作用及機(jī)理。方法取ellitusrats.Methods60ellitusIRuscletissueeodelgroup(P<0.01).ConclusionStrengtheningSpleenandActivatingBloodPrescriptioncanup-regulatetheexpressionofGLUT-4geneinType2Dia

2、beticrats,andimproveinsulinresistance.　　KeyentalResearch　　目前普遍認(rèn)為，IR和Ins分泌缺陷是2型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，其中IR是貫穿于2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展的全過程的重要因素，IR被認(rèn)為是基因與環(huán)境間相互作用的結(jié)果。在眾多候選基因中，GLUT-4與2型糖尿病胰島素抵抗的發(fā)生關(guān)系密切[1]。本實(shí)驗(yàn)以健脾活血方治療2型糖尿病IR模型大鼠，觀察其對2型糖尿病IR大鼠GLUT-4mRNA表達(dá)的改善作用并探討其機(jī)理?！　?材料　　1.1動物DF-U50V型)中保存?zhèn)溆?。整個實(shí)驗(yàn)過程中模型組大鼠死亡2只，中藥低劑量組大鼠死亡1只?！　?.2檢測指標(biāo)及方

3、法　　2.2.1空腹血糖(FBG)測定給藥前及給藥2周后，大鼠禁食12h，斷尾采血。用血糖儀測定血糖?！　?.2.2空腹胰島素(Fins)測定給藥前及給藥2周后，大鼠禁食12h，眼眶靜脈叢取血5ml，用LG-10A離心機(jī)37℃恒溫離心(2500r/min,10min)15min，取血清，采用放射免疫雙抗體法測定?！　?.2.3RT-PCR法檢測骨骼肌GLUT-4mRNA的表達(dá)提取骨骼肌總RNA。實(shí)驗(yàn)步驟：①骨骼肌組織勻漿：于冰上進(jìn)行。取100mg骨骼肌組織，放入玻璃勻漿器中，加入Trizol試劑1ml研磨。②25℃水浴箱中孵育5min。③將勻漿產(chǎn)物移入1.5ml離心管中，加入氯仿0.2ml，混

4、搖15s，室溫放置5min。④4℃離心(12000r/min)15min。⑤將上層無色液體移入1.5ml離心管中，加入0.5ml異丙醇，室溫放置10min后混勻。⑥4℃離心(12000r/min)15min。⑦去上清液。加入75%乙醇1ml，4℃離心(7500r/min)5min。重復(fù)該步驟2次。⑧放置10min。⑨用水溶解后計(jì)算所提RNA量，使A260/A280比值保持在1.8以上。-70℃低溫冰箱保存?！　NA逆轉(zhuǎn)錄。實(shí)驗(yàn)步驟：①取上述標(biāo)本RNA2μg，加入總量20μl下述混合液體：5×緩沖液4.0μl;10mmol/LdNTP2.0μl;逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl;上、下游引物各0.5μl;2

5、5mmol/LMgSO41.5μl;RNA2.0μg;加入去Rnase的蒸餾水9.5μl。②12000r/min，離心約1min。③42℃水浴箱中孵育45min合成cDNA。④95℃水浴箱中10min滅活逆轉(zhuǎn)錄酶?！　NA聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。實(shí)驗(yàn)步驟：①每個PCR擴(kuò)增管中加總量25μl下述混合液：模板cDNA1.0μl;5×緩沖液5.0μl;10mmol/LdNTP2.0μl;Taq酶1.0μl;上、下游引物各0.5μl;加入雙蒸水15.5μl。②振蕩，略離心上述混合液。③PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增。反應(yīng)條件：變性,94℃30s;退火,60℃60s;延伸,70℃60s。共做36個循環(huán)后，72℃延伸

6、5min?！　T-PCR產(chǎn)物分析(光密度掃描法)。取10μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物10μl以1.5%瓊脂糖凝膠，100V電壓電泳60min，GoldVieRNA表達(dá)的影響RT-PCR產(chǎn)物在瓊脂糖電泳凝膠紫外燈下均可見：各組β-actin電泳條帶亮度一致，擴(kuò)增片段均為300bp。骨骼肌GLUT-4mRNA的500bp片段，但各組電泳條帶亮度有明顯差異，模型組大鼠骨骼肌GLUT-4mRNA的表達(dá)減弱，與空白組大鼠比較有顯著性差異(P<0.01);各治療組大鼠骨骼肌GLUT-4mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，以羅格列酮組和健脾活血方高劑量組的改善最為明顯，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01);健脾活血

7、方高劑量組與羅格列酮組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖1～2和表4。表4對大鼠骨骼肌中GLUT-4/β-actinmRNART-PCR電泳產(chǎn)物灰度掃描比值的影響與模型組比較，﹡﹡P<0.01，﹡P<0.05　　4討論　　GLUT-4是一種分子量為45～55kD，含509個氨基酸單一多肽鏈的糖蛋白，具有12個跨膜螺旋片段。GLUT-4存在于胰島素敏感的骨骼肌、心肌和脂肪細(xì)胞中。在沒有胰島素刺激時主要