鉛對(duì)大鼠海馬ca1和ca3區(qū)bcl2陽(yáng)性細(xì)胞影響

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1、鉛對(duì)大鼠海馬CA1和CA3區(qū)Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞影響【關(guān)鍵詞】鉛　　有文獻(xiàn)報(bào)道，鉛的神經(jīng)毒性可能和腦細(xì)胞凋亡有關(guān)〔1，2〕。近年來研究表明，海馬結(jié)構(gòu)各亞區(qū)的Bcl2基因表達(dá)異常可能是鉛觸發(fā)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡發(fā)生的主要介導(dǎo)因素〔3〕。目前發(fā)現(xiàn)，Bcl2（Bcelllymhona/leuRenia2)基因在細(xì)胞凋亡調(diào)控過程中起著重要作用，Bcl2蛋白不僅具有抗淋巴細(xì)胞凋亡作用，也具有抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用〔3〕。張榮〔4〕等采用流式細(xì)胞儀研究發(fā)現(xiàn)，染鉛與腦細(xì)胞發(fā)生凋亡率有劑量反應(yīng)關(guān)系，與Bcl2含量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。但染鉛對(duì)海馬不同亞

2、區(qū)Bcl2蛋白表達(dá)的影響，目前尚不清楚。本研究采用免疫組化法觀察染鉛不同時(shí)點(diǎn)大鼠海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化，以了解鉛對(duì)海馬各區(qū)細(xì)胞的影響?！　?材料與方法　　11實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及處理選用剛斷乳健康g/（kg·bg/kg）麻醉，開胸，夾閉腹主動(dòng)脈，經(jīng)左心室插管，用37℃生理鹽水100～150ml快速?zèng)_洗后，以含4%多聚甲醛的磷酸鹽緩沖液（PBS）（01mol/L,pH74)灌注固定，迅速取腦后，置多聚甲醛中繼續(xù)固定7～9h（4℃），移入20%蔗糖溶液浸泡12h以上。恒冷箱連續(xù)冰凍切片（片厚為50μm),進(jìn)

3、行Bcl2免疫組化反應(yīng)?！　?22Bcl2免疫組化反應(yīng)切片移入37℃TritonH2O2中反應(yīng)30min,PBS緩沖液漂洗后以3%正常羊血清封閉30min，然后加Bcl2一抗（1：200），4℃溫盒內(nèi)孵育72h后，免疫組化法（ABC）顯色，常規(guī)裱片，脫水，透明，封片。　　123結(jié)果判斷Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞顯棕色或棕色反應(yīng)顆粒，不顯色為陰性反應(yīng)；以Bcl2陽(yáng)性的癲癇大鼠海馬切片為陽(yáng)性對(duì)照，以正常羊血清代替Bcl2一抗作為對(duì)照，結(jié)果為陰性反應(yīng)；以01mol/LPBS(pH74)代替Bcl2一抗為空白對(duì)照，結(jié)果為陰

4、性反應(yīng)?！　?24Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)每組選取對(duì)應(yīng)斷面的海馬腦片15張（每只動(dòng)物取2～3張），采用尺型計(jì)數(shù)器在相同放大倍數(shù)（×200）的光鏡下，分別計(jì)數(shù)CA1和CA3區(qū)每毫米的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)?！　?3統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS80軟件進(jìn)行分析。　　22不同染鉛時(shí)間海馬區(qū)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)組間比較(表1)　　表1不同染鉛時(shí)間大鼠海馬各區(qū)Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較（略）　　注：與對(duì)照組比較，*P<005,**P<001;腦片數(shù)=15　　3討論　　有報(bào)道〔2，4〕，染鉛大鼠大腦皮層、海馬和小腦細(xì)胞凋亡率均明顯高于對(duì)照組，Bcl2

5、蛋白是一種神經(jīng)保護(hù)蛋白，其抗凋亡作用與其抗氧化作用有關(guān)〔5〕。張榮等發(fā)現(xiàn)，大鼠染鉛5d后,皮層、海馬和小腦Bcl2基因表達(dá)下降，Bcl2含量與染鉛劑量呈相關(guān)〔4〕。鑒于細(xì)胞凋亡對(duì)于胚胎發(fā)育、維持細(xì)胞總體數(shù)量等過程都具有重要作用，所以腦細(xì)胞的凋亡必然會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)的結(jié)構(gòu)和功能造成損傷。鉛對(duì)于海馬不同亞區(qū)神經(jīng)元的代謝及功能如LTP的影響不同〔6〕，推測(cè)鉛對(duì)海馬不同亞區(qū)Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞的影響可能不同。進(jìn)一步研究染鉛對(duì)海馬不同亞區(qū)Bcl2蛋白表達(dá)的影響，將對(duì)深入了解鉛干擾學(xué)習(xí)記憶機(jī)制提供重要依據(jù)。本研究于大鼠染鉛12h后，觀察到海馬C

6、Al區(qū)Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯減少(P<001),24h時(shí)仍處于較低水平(P<005),而在不同時(shí)間染鉛組與對(duì)照組間海馬CA3區(qū)Bcl2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)差異已無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。鉛的神經(jīng)毒性作用尤其是對(duì)學(xué)習(xí)記憶影響的機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，鉛對(duì)海馬不同亞區(qū)Bcl2蛋白表達(dá)的不同影響僅僅是其分子機(jī)制的一個(gè)環(huán)節(jié)，完全闡明鉛神經(jīng)毒性，尤其是對(duì)學(xué)習(xí)記憶影響的機(jī)制尚需深入研究，但鉛對(duì)海馬不同亞區(qū)Bcl2蛋白表達(dá)的不同影響說明其作用機(jī)制與海馬CAl區(qū)細(xì)胞凋亡保護(hù)基因的蛋白表達(dá)水平下調(diào)有關(guān)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】　　〔1〕Savol

7、ainenKM,EerikainonS.Interactionofexcitatoryneruotransmittersanddenobioticsinexcitotoxicityandoxidativestress［J］.GlutamateandLeadToxicolLett,1998,102:363-367.　　〔2〕ObertoA,MarksN,EvansHZ,etal.Lead(Pb2+)promatesapoptosisinneplications［J］.JPharmacolExpTher,1996,279(1):435-

8、442.　　〔3〕HockenberyD,NunezG,MillimanC,etal.Bcl2isaninnermitochondrialmembraneproteinthatblocksprogrammedcelldeath［J］