鉛對大鼠海馬ca1和ca3區(qū)bcl2陽性細胞影響論文

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1、鉛對大鼠海馬CA1和CA3區(qū)Bcl2陽性細胞影響論文【摘要】目的了解海馬各區(qū)Bcl2陽性細胞在鉛神經(jīng)毒機制中的作用。方法采用免疫組化（ABC）法觀察腹腔注射130mg/kg醋酸鉛溶液大鼠12和24h后海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)Bcl2陽性細胞數(shù)目的變化。結果染鉛12和24h大鼠海馬CA1區(qū)Bcl2陽性細胞數(shù)目（分別為126.05±33.21和(57.45±37.66）與對照組比較（201.94±31.72）明顯減少（P0.05,或P0.01），但各組大鼠海馬CA3區(qū)及其他組的CA1區(qū)Bcl2陽性細胞數(shù)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。結論染鉛大鼠海馬CA1區(qū)Bcl2陽性細胞

2、數(shù)目減少可能與鉛的神經(jīng)毒作用有關?！娟P鍵詞】鉛有文獻報道，鉛的神經(jīng)毒性可能和腦細胞凋亡有關〔1，2〕。近年來研究表明，海馬結構各亞區(qū)的Bcl2基因表達異?？赡苁倾U觸發(fā)海馬神經(jīng)細胞凋亡發(fā)生的主要介導因素〔3〕。目前發(fā)現(xiàn)，Bcl2（Bcelllymhona/leuRenia2)基因在細胞凋亡調(diào)控過程中起著重要作用，Bcl2蛋白不僅具有抗淋巴細胞凋亡作用.freelg/（kg·bg/kg）麻醉，開胸，夾閉腹主動脈，經(jīng)左心室插管，用37℃生理鹽水100～150ml快速沖洗后，以含4%多聚甲醛的磷酸鹽緩沖液（PBS）（01mol/L,pH74)灌注固定，迅速取腦后，置多聚甲醛中繼續(xù)固定7～

3、9h（4℃），移入20%蔗糖溶液浸泡12h以上。恒冷箱連續(xù)冰凍切片（片厚為50μm),進行Bcl2免疫組化反應。122Bcl2免疫組化反應切片移入37℃TritonH2O2中反應30min,PBS緩沖液漂洗后以3%正常羊血清封閉30min，然后加Bcl2一抗（1：200），4℃溫盒內(nèi)孵育72h后，免疫組化法（ABC）顯色，常規(guī)裱片，脫水，透明，封片。123結果判斷Bcl2陽性細胞顯棕色或棕色反應顆粒，不顯色為陰性反應；以Bcl2陽性的癲癇大鼠海馬切片為陽性對照，以正常羊血清代替Bcl2一抗作為對照，結果為陰性反應；以01mol/LPBS(pH74)代替Bcl2一抗為

4、空白對照，結果為陰性反應。124Bcl2陽性細胞計數(shù)每組選取對應斷面的海馬腦片15張（每只動物取2～3張），采用尺型計數(shù)器在相同放大倍數(shù)（×200）的光鏡下，分別計數(shù)CA1和CA3區(qū)每毫米的陽性細胞數(shù)。13統(tǒng)計分析采用SPSS80軟件進行分析。2結果21不同染鉛時間海馬區(qū)光鏡下觀察結果光鏡下，海馬結構各區(qū)存在Bcl2反應陽性神經(jīng)元；染鉛3h時，海馬各亞區(qū)均無明顯變化；染鉛6h時，海馬CA1和CA3區(qū)Bcl2陽性細胞顯色稍加深，陽性細胞數(shù)有所增加；染鉛12h時，海馬CA1區(qū)陽性細胞顯色明顯變淺，陽性細胞數(shù)明顯減少，而CA3區(qū)未見明顯變化；染鉛24h，海馬CA1區(qū)與12h比較Bc1

5、2陽性細胞顯色加深，陽性細胞數(shù)漸增多，但較對照組的陽性細胞數(shù)少，顯色強度弱，而CA3區(qū)未見明顯變化。22不同染鉛時間海馬區(qū)陽性細胞數(shù)組間比較(表1)表1不同染鉛時間大鼠海馬各區(qū)Bcl2陽性細胞數(shù)比較（略）注：與對照組比較，*P005,**P001;腦片數(shù)=153討論有報道〔2，4〕，染鉛大鼠大腦皮層、海馬和小腦細胞凋亡率均明顯高于對照組，Bcl2蛋白是一種神經(jīng)保護蛋白，其抗凋亡作用與其抗氧化作用有關〔5〕。張榮等發(fā)現(xiàn)，大鼠染鉛5d后,皮層、海馬和小腦Bcl2基因表達下降，Bcl2含量與染鉛劑量呈相關〔4〕。鑒于細胞凋亡對于胚胎發(fā)育、維持細胞總體數(shù)量等過程都具有重要作用，所以腦細

6、胞的凋亡必然會對中樞神經(jīng)的結構和功能造成損傷。鉛對于海馬不同亞區(qū)神經(jīng)元的代謝及功能如LTP的影響不同〔6〕，推測鉛對海馬不同亞區(qū)Bcl2陽性細胞的影響可能不同。進一步研究染鉛對海馬不同亞區(qū)Bcl2蛋白表達的影響，將對深入了解鉛干擾學習記憶機制提供重要依據(jù)。本研究于大鼠染鉛12h后，觀察到海馬CAl區(qū)Bcl2陽性細胞數(shù)目明顯減少(P001),24h時仍處于較低水平(P005),而在不同時間染鉛組與對照組間海馬CA3區(qū)Bcl2陽性細胞數(shù)差異已無統(tǒng)計學意義(P005)。鉛的神經(jīng)毒性作用尤其是對學習記憶影響的機制相當復雜，鉛對海馬不同亞區(qū)Bcl2蛋白表達的不同影響僅僅是其分子機制的一個

7、環(huán)節(jié)，完全闡明鉛神經(jīng)毒性，尤其是對學習記憶影響的機制尚需深入研究，但鉛對海馬不同亞區(qū)Bcl2蛋白表達的不同影響說明其作用機制與海馬CAl區(qū)細胞凋亡保護基因的蛋白表達水平下調(diào)有關?！?/p>