兩點(diǎn)法、終點(diǎn)法、速率法

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1、WORD格式可編輯什么叫兩點(diǎn)法、終點(diǎn)法、速率法?兩點(diǎn)法：測(cè)定酶反應(yīng)開始后某一時(shí)間內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量以求取酶反應(yīng)初速度的方法。終點(diǎn)法：通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開始到反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量，以求出酶活力的方法，亦稱平衡法。速率法：是指連續(xù)測(cè)定(每15秒~1分鐘監(jiān)測(cè)一次)酶反應(yīng)過(guò)程中某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物的濃度隨時(shí)間的變化來(lái)求出酶反應(yīng)的初速度的方法，即連續(xù)監(jiān)測(cè)法。一、常用生化檢測(cè)項(xiàng)目分析方法舉例　　1．終點(diǎn)法檢測(cè)　常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶

2、法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測(cè)定法）、鈣（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。以上項(xiàng)目中，除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而采用一點(diǎn)終點(diǎn)法外，其它測(cè)定項(xiàng)目都可使用雙試劑故能選用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，包括總蛋白、白蛋白測(cè)定均已有雙試劑可用?！　?．固定時(shí)間法　苦味酸法測(cè)定肌酐采用此法。（兩點(diǎn)法）　　3．連續(xù)監(jiān)測(cè)法　對(duì)于酶活性測(cè)定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測(cè)法，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨?；D(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌

3、酸激酶等。一些代謝物酶法測(cè)定的項(xiàng)目如己糖激酶法測(cè)定葡萄糖、脲酶偶聯(lián)法測(cè)定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。4．透射比濁法　透射比濁法可用于測(cè)定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項(xiàng)目，多數(shù)屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗"O"、類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。二、分析參數(shù)設(shè)置分析儀的一些通用操作步驟如取樣、沖洗、吸光度檢測(cè)、數(shù)據(jù)處理等，其程序均已經(jīng)固化在存儲(chǔ)器里，用戶不能修改。各種測(cè)定項(xiàng)目的分析參數(shù)（analysis　paramete）大部分也已設(shè)計(jì)好，存于磁盤中，供用戶使用；目前大多數(shù)生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數(shù)

4、。生化分析儀一般另外留一些檢測(cè)項(xiàng)目的空白通道，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。因此必須理解各參數(shù)的確切意義。一、分析參數(shù)介紹（一）必選分析參數(shù)這類參數(shù)是分析儀檢測(cè)的前提條件，沒(méi)有這些參數(shù)無(wú)法進(jìn)行檢測(cè)。1．試驗(yàn)名稱試驗(yàn)名稱（testcode）是指測(cè)定項(xiàng)目的標(biāo)示符，常以項(xiàng)目的英文縮寫來(lái)表示。2．方法類型（也稱反應(yīng)模式）方法類型（assay）有終點(diǎn)法、兩點(diǎn)法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法等，根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測(cè)方法原理選擇其中一種反應(yīng)類型。3．反應(yīng)溫度一般有30℃、37℃可供選擇，通常固定為37℃。4．主波長(zhǎng)主波長(zhǎng)（primarywavelength）是指定一個(gè)與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收有

5、關(guān)的波長(zhǎng)。專業(yè)技術(shù)資料分享WORD格式可編輯5．次波長(zhǎng)次波長(zhǎng)（secondarywavelength）是在使用雙波長(zhǎng)時(shí)，要指定一個(gè)與主波長(zhǎng)、干擾物質(zhì)光吸收有關(guān)的波長(zhǎng)。6．反應(yīng)方向反應(yīng)方向（responsedirection）有正向反應(yīng)和負(fù)向反應(yīng)兩種，吸光度增加為正向反應(yīng)，吸光度下降為負(fù)向反應(yīng)。7．樣品量樣品量（samplingvolum）一般是2μl～35μl，以0.1μl步進(jìn)，個(gè)別分析儀最少能達(dá)到1.6μl。可設(shè)置常量、減量和增量。8．第一試劑量第一試劑量（firstregengtvolum）一般是20～300μl，以1μl步進(jìn)。9．第二試劑量第二試劑量

6、（secondregengtvolum）一般也是20～300μl，以1μl步進(jìn)。10．總反應(yīng)容量總反應(yīng)容量（totalreactingvolum）在不同的分析儀有一個(gè)不同的規(guī)定范圍，一般是180～350μl，個(gè)別儀器能減少至120μl?？偡磻?yīng)容量太少無(wú)法進(jìn)行吸光度測(cè)定。11．孵育時(shí)間孵育時(shí)間（incubatetime）在終點(diǎn)法是樣品與試劑混勻開始至反應(yīng)終點(diǎn)為止的時(shí)間，在兩點(diǎn)法是第一個(gè)吸光度選擇點(diǎn)開始至第二個(gè)吸光度選擇點(diǎn)為止的時(shí)間。12．延遲時(shí)間延遲時(shí)間（delaytime）在連續(xù)監(jiān)測(cè)法中樣品與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻開始至連續(xù)監(jiān)測(cè)期第一個(gè)吸光度選擇點(diǎn)之間的

7、時(shí)間。13．連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間（continuousmonitoringtime）在延遲時(shí)間之后即開始，一般為60～120s，不少于4個(gè)吸光度檢測(cè)點(diǎn)（3個(gè)吸光度變化值）。14．校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)及濃度校準(zhǔn)曲線線性好并通過(guò)坐標(biāo)零點(diǎn)的，可采用一個(gè)校準(zhǔn)液（calibrator）；線性好但不通過(guò)坐標(biāo)零點(diǎn)，應(yīng)使用兩個(gè)校準(zhǔn)液；對(duì)于校準(zhǔn)曲線呈非線性者，必須使用兩個(gè)以上校準(zhǔn)液。每一個(gè)校準(zhǔn)液都要有一個(gè)合適的濃度。15．校準(zhǔn)K值或理論K值通過(guò)校準(zhǔn)得到的K值為校準(zhǔn)K值（calibratecoefficient）或由計(jì)算得出的K值為理論K值。16．線性范圍即方法的線性范圍（line

8、arityrange），超過(guò)此范圍應(yīng)增加樣品量或減少樣品量重測(cè)。與