化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測丙型肝炎抗體的臨床評價

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1、化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測丙型肝炎抗體的臨床評價萬大朋1劉勝武21.武漢市普愛醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北武漢430033；2.武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北武漢430071[摘要]目的分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測中的應(yīng)用價值。方法同時應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測60例丙肝確診感染者和100例健康體檢者的抗丙型肝炎病毒抗體，計(jì)算其陰性符合率、陽性符合率以及總符合率，用Kappa檢驗(yàn)計(jì)算待評價診斷一致性。選取化學(xué)發(fā)光法初檢驗(yàn)結(jié)果為陽性的標(biāo)本100例，按照S/CO.值分為低值組（1<S/CO.<8）和高值組（S/CO.≥8），經(jīng)抗HCV經(jīng)重組

2、免疫印跡試驗(yàn)（RIBA）對化學(xué)發(fā)光法試劑的檢測界限值進(jìn)行評估。結(jié)果ELISA法與化學(xué)發(fā)光法檢測HCV抗體結(jié)果陽性符合率：87.7%，陰性符合率：91.3%，總符合率：90.0%，Kappa系數(shù)為0.760，兩者具有高度的一致性，兩種方法在常規(guī)臨床檢測中并無明顯差異。陽性低值組中12份標(biāo)本經(jīng)RIBA試劑確證為陽性，而高值組中44份標(biāo)本確證為陽性。結(jié)論ELISA是目前HCV抗體篩查中較為常用的方法，其試劑盒多為第三代試劑，特異性較好，化學(xué)發(fā)光法近期在HCV抗體篩查中逐漸得到重視，其試劑的靈敏度較高，兩種試劑均可用于丙型肝炎抗體檢測。化學(xué)發(fā)光法的陽性判定標(biāo)

3、準(zhǔn)應(yīng)進(jìn)行評估，以提高特異性。.jyqkeryville，CA。1．3檢測結(jié)果判斷ELISA法:以（0.1×陽性對照平均A值+陰性對照平均A值）確定Cut-off值，以檢測值≥Cut-off值為陽性。CLIA法:S/CO.值≥1為陽性。確認(rèn)試驗(yàn)：出現(xiàn)2條以上HCV蛋白條帶為陽性。1．4方法同時用ELISA法和CLIA法對160份樣本進(jìn)行抗HCV抗體檢測，按說明書進(jìn)行操作。另選取100份化學(xué)發(fā)光法初檢結(jié)果陽性的標(biāo)本，分為兩組：低值組（1＜S/CO.＜8）和高值組（S/CO.≥8）。對兩者結(jié)果不符的樣本用免疫印記法試劑（HCVRIBA）再次進(jìn)行確認(rèn)，以再確

4、認(rèn)結(jié)果為正確。1．5統(tǒng)計(jì)方法用四格表統(tǒng)計(jì)臨床數(shù)據(jù)，并計(jì)算陰性、陽性以及總符合率，所得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0處理，樣本率以χ2檢驗(yàn)。用Kappa檢驗(yàn)計(jì)算發(fā)光法試劑與ELISA試劑的診斷一致性，按照Kappa系數(shù)大小以極差、微弱、弱、中度、高度和極強(qiáng)對診斷一致性強(qiáng)度進(jìn)行判斷，極差：Kappa系數(shù)＜0；微弱：Kappa系數(shù)0～0.2；弱：Kappa系數(shù)0.21～0.4；中度：Kappa系數(shù)0.41～0.6；高度：Kappa系數(shù)0.61～0.8；極強(qiáng)：Kappa系數(shù)0.81～1.0[2]。2結(jié)果2．1ELISA和CLIA方法檢測丙型肝炎病毒抗體結(jié)

5、果的符合性結(jié)果顯示使用傳統(tǒng)ELISA試劑與化學(xué)發(fā)光方法試劑檢測抗HCV抗體的診斷一致性較高，臨床檢測中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。見表1。2．2化學(xué)發(fā)光法抗-HCV初檢陽性標(biāo)本的RIBA確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果見表2。3討論目前廣泛使用的第三代HCV抗體ELISA試劑增加了HCVNs5區(qū)表達(dá)的蛋白作為抗原，大增加了靈敏度和特異性。但臨床使用該類試劑篩檢HCV感染者，仍存在一定數(shù)量的假陽性和假陰性結(jié)果[3]，特別是在HCV低流行率人群中，如無償獻(xiàn)血者，假陽性問題一直比較突出。此外，國內(nèi)常用的HCV抗體酶免試劑皆沒有灰區(qū)的設(shè)定，試劑盒cutoff值計(jì)算方法各廠

6、家也都不一致，導(dǎo)致國產(chǎn)試劑盒之間的檢測性能存在較大的異質(zhì)性，亦是假陽性比較多的原因[4-5]。在臨床實(shí)驗(yàn)室中檢驗(yàn)中，需先對使用的方法和程程序進(jìn)行評估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗(yàn)是用于分析計(jì)數(shù)資料和等級分組資料一致性檢驗(yàn)中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽性）檢測中，一般選擇使用使用檢驗(yàn)法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測中的Kappa系數(shù)達(dá)到0.76，具有高度一致性，與同類研究報道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。E

7、LISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實(shí)際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。另外該研究參照美國CDC丙型肝炎實(shí)驗(yàn)導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽性作為分組依據(jù)，對發(fā)光法初篩陽性的標(biāo)本再進(jìn)行RIBA確認(rèn)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)低值組的陽性率為24%，而高值組的陽性率為88%，提示中國人群的抗HCV陽性預(yù)測值與美國有一定的差異，目前的抗-HCV診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)

8、現(xiàn)，我國HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國所有地區(qū)[4]。提示實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對抗HCV試劑的S/CO