htert反義寡核苷酸對hl

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1、hTERT反義寡核苷酸對HL作者：孫玲，王峰，孫慧，樂曉萍，葛秀峰，姜中興，張欽憲【摘要】　　為了研究hTERT基因反義寡核苷酸（ASODN）對HL-60細(xì)胞增殖及端粒酶活性的抑制作用，并探討HL-60細(xì)胞端粒酶活性與hTERT基因表達(dá)的關(guān)系，應(yīng)用反義寡核苷酸封閉HL-60細(xì)胞hTERT基因的表達(dá)，RT-PCR方法檢測該基因表達(dá)抑制情況，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)，應(yīng)用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法檢測HL-60細(xì)胞端粒酶活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：反義硫代寡核苷酸作用于HL-60細(xì)胞72小時后，hTERT基因表達(dá)明顯受抑，細(xì)胞生長受抑，增殖能

2、力減弱，其抑制作用具有序列特異性及濃度、時間依賴性。端粒酶活性檢測顯示：反義寡核苷酸10、20和30μmol/L作用組OD450-690值分別為1.504±0.47、1.223±0.39，0.944±0.16，與未作用組（2.648±0.42）比較，差異有顯著性（P<0.05）；正義寡核苷酸20μmol/L作用組（OD450-690值為2.376±065）與未作用組比較，差異無顯著性（P>0.05）。TRAP-PAGE檢測表明：hTERTASODN作用組較SODN作用組端粒酶條帶明顯減少，以30μmol/L作用組條帶最少。結(jié)論：hTERT基因反義寡核苷酸能夠

3、通過封閉hTERT基因的表達(dá)而抑制HL-60細(xì)胞增殖，下調(diào)端粒酶活性?！娟P(guān)鍵詞】HL-60細(xì)胞；hTERT；反義寡核苷酸；端粒酶活性　　InhibitionofhTERTAntisenseOligodeoxynucleotideonProliferationandTelomeraseActivityinHL-60Cells　　AbstractThisstudyeraseactivityinHL-60cellsandtoexploretherelativitybeteraseactivityandtheexpressionofhTERTgeneinHL-60cells.Af

4、tertreatedbyhTERTASODNtheexpressionofhTERTorphologicalchangesofHL-60cellsicroscopy，thecellproliferationeasuredbyMTTmethod，andthetelomeraseactivityinede.OD450-690valuesol/LASODNfor72hours.Thedifferenceol/Lgroupsol/LASODNgrouprespectively(P<0.05)，butthedifferenceol/LSODNgroup(2.376±0.65)

5、eraseimagebandsol/L.ItisconcludedthatthehTERTASODNmayinhibittheproliferationanddoeraseactivityinHL-60cellsbysealingtheexpressionofhTERTgene.　　Keyeraseactivity端粒是真核細(xì)胞染色體末端特有的保護(hù)性結(jié)構(gòu)，它能維持染色體末端的完整性。隨著細(xì)胞的分裂、分化，端粒逐漸縮短，當(dāng)端?？s短至一定程度，細(xì)胞將出現(xiàn)衰老、死亡。端粒酶是一種逆轉(zhuǎn)錄酶，它能合成端粒并接到染色體末端，補(bǔ)充由于DNA分裂造成的端粒縮短，從而維持端粒長度，使細(xì)胞永

6、生化［1］。研究表明：端粒酶活性增高與許多腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，在急性白血病中存在端粒酶的高表達(dá)［2］。人們普遍認(rèn)為，端粒酶活化是腫瘤細(xì)胞無限增殖的必要條件。抑制端粒酶的活性可以達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的目的。人類端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTRET）基因與端粒酶活性具有直接相關(guān)性［3］。我們利用反義技術(shù)將hTERT反義寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotide，ASODN）導(dǎo)入人類髓性白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞，探討其對白血病細(xì)胞的增殖及端粒酶活性的影響，為開辟白血病治療

7、新途徑提供有價值的實(shí)驗(yàn)室資料?！　〔牧虾头椒ā　〖?xì)胞培養(yǎng)　　HL-60細(xì)胞為鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院組胚教研室保存株，采用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，將HL-60細(xì)胞置37℃、5%CO2、飽和濕度的恒溫孵箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)選用對數(shù)生長期細(xì)胞，細(xì)胞懸浮成團(tuán)，生長良好，隔天換液并傳代1次，成活率>95%?！　》戳x核酸的設(shè)計與合成　　選擇端粒酶hTERTmRNA轉(zhuǎn)譯起始區(qū)作為靶點(diǎn)合成全硫代修飾的反義寡核苷酸（ASODN）片段；另設(shè)正義全硫代修飾的寡核苷酸（SODN）片段作為對照。合成序列如下：h-ASODN:5’-GGAGCG