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1、聚酰胺吸附鋁離子顯色法測(cè)定烏藥葉中總黃酮的含量【摘要】 目的采用聚酰胺吸附-鋁離子顯色法測(cè)定烏藥葉中總黃酮的含量。方法經(jīng)聚酰胺吸附后的樣品,以蘆丁為對(duì)照品,在420nm處測(cè)定吸收波長(zhǎng),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定濃度。結(jié)果總黃酮在0.002~0.10mg·ml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9995)。該法的平均加樣回收率為97.5%,RSD為2.76%(n=5)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、可靠。【關(guān)鍵詞】烏藥;總黃酮;聚酰胺;紫外分光光度法 烏藥Linderaaggregate(Sims)Kosterm.,樟科Lauraceae山胡椒屬(Lindera)藥用植物?!吨袊?guó)藥典
2、》(2005版)規(guī)定其塊根入藥,具有順氣止痛、溫腎散寒等功效,臨床上被廣泛用于治療寒凝氣滯所致脘腹疼痛,中成藥配伍廣泛。據(jù)報(bào)道烏藥葉中黃酮資源豐富,為烏藥葉中抗菌、抗炎的主要成分[1,2]。關(guān)于應(yīng)用紫外-可見光分光光度法測(cè)定其他植物中總黃酮的含量已有相關(guān)報(bào)道[3~6],具有操作簡(jiǎn)單、數(shù)據(jù)可靠等優(yōu)點(diǎn);但是關(guān)于用分光光度法分析烏藥葉中總黃酮的含量尚未見相關(guān)的報(bào)道。為更好地開發(fā)利用烏藥葉資源,本文建立了聚酰胺吸附-鋁離子顯色法,對(duì)烏藥葉中總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定?! ?儀器與材料 1.1儀器UV2401PC型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司);RE52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上
3、海亞榮生化儀器廠);FA2004A型電子天平(上海精天電子儀器有限公司);SB80超聲波清洗機(jī)(寧波江南藥廠)?! ?.2試劑無(wú)水乙醇、甲醇(分析級(jí)AR,宜興市展望化工試劑廠),石油醚(沸程60~90℃,上海試劑二廠);聚酰胺(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠);AlCl3·6H2O(分析級(jí)AR,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)0080-9705)?! ?.3樣品烏藥樣地設(shè)在浙江省天臺(tái)縣三州鄉(xiāng)。200610在樣地隨機(jī)選取植株,用濕布包裹,塑料袋封裝,立即帶回實(shí)驗(yàn)室。將材料洗凈,自然風(fēng)干,70℃下干燥12h,研磨后過(guò)金屬網(wǎng)篩,將
4、烘干樣品放入到干燥器中保存,備用?! ?方法與結(jié)果 2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.025g,置于25ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,即得濃度為1.0mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液?! ?.2供試品溶液的制備精密稱取烏藥葉粉末1.0g,置250ml三頸燒瓶中,用50%乙醇水浴加熱(85℃)回流3次,每次溶劑100ml,回流時(shí)間1h,合并提取液,減壓蒸餾除去溶劑,用甲醇溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0ml。然后,加入10ml水,用石油醚(60~90℃)萃取3次,每次用量為30ml。萃取液經(jīng)減壓蒸餾除去甲醇后,過(guò)聚酰胺柱,用95%乙醇洗脫至無(wú)黃酮類物質(zhì)為止。洗脫液減壓
5、濃縮,除去溶劑,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml,備用?! ?.3測(cè)定波長(zhǎng)的確定精密移取1ml供試品溶液于10ml容量瓶中,加入4ml1%氯化鋁甲醇溶液,然后用甲醇定容至10ml。同法,制得空白,在200~600nm進(jìn)行掃描,記錄紫外吸收光譜,見圖1。 從圖1可以看出供試品溶液在225,275nm和420nm有吸收峰。由于420nm干擾較小,因此確定檢測(cè)波長(zhǎng)為420nm。 2.4顯色時(shí)間的確定精密移取1ml供試品溶液于10ml容量瓶中,加入4ml1%氯化鋁甲醇溶液,然后用甲醇定容至10ml。每隔1min于420nm處測(cè)定其吸光度。結(jié)果表明,供試品溶液顯色15m
6、in后,吸光度幾乎維持穩(wěn)定。 圖1樣品的紫外吸收光譜圖(略) 2.5聚酰胺用量的考察取適量聚酰胺粉末用95%乙醇煮沸30min后抽濾,如此重復(fù)3次。將最后抽干的粉末先置于室溫下自然干燥30min,然后放入烘箱70℃下干燥1h?! 》謩e稱取0.15,0.30,0.45,0.60,0.90g聚酰胺粉,以95%乙醇作流動(dòng)相,裝入層析柱中,加入黃酮提取液,以10~15倍95%乙醇洗脫,采用鋁離子顯色反應(yīng)檢測(cè)出口流出液。將流出液濃縮用甲醇定容至50ml,用紫外測(cè)定其吸光值變化。結(jié)果表明當(dāng)聚酰胺用量超過(guò)0.45g之后,吸光度變化不大?! ?.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取蘆丁對(duì)照
7、品溶液0.2,0.5,1.0,5.0,10ml置于10ml容量瓶中,甲醇定容。分別移取1ml溶液,分別置于10ml容量瓶中,加入4ml1%的氯化鋁-甲醇溶液,用甲醇定容至刻度線,搖勻,放置15min。同法制得空白液,按分光光度法,在420nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光值。以吸光值為縱坐標(biāo),對(duì)照品溶液得濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線,進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為:A=7.0592C-0.0066,相關(guān)系數(shù)r=0.9995。結(jié)果表明,蘆丁對(duì)照品在所試濃度0.002~0.10mg/ml內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?! ?.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液按上述方法連續(xù)檢測(cè)6次,RSD=0.24%,可見該方