聚酰胺吸附鋁離子顯色法測(cè)定烏藥葉中總黃酮的含量

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1、聚酰胺吸附鋁離子顯色法測(cè)定烏藥葉中總黃酮的含量【摘要】　　目的采用聚酰胺吸附-鋁離子顯色法測(cè)定烏藥葉中總黃酮的含量。方法經(jīng)聚酰胺吸附后的樣品，以蘆丁為對(duì)照品，在420nm處測(cè)定吸收波長(zhǎng)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定濃度。結(jié)果總黃酮在0.002～0.10mg·ml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9995）。該法的平均加樣回收率為97.5%,RSD為2.76%(n=5)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、可靠。【關(guān)鍵詞】烏藥；總黃酮；聚酰胺；紫外分光光度法　　烏藥Linderaaggregate（Sims）Kosterm.，樟科Lauraceae山胡椒屬（Lindera）藥用植物?！吨袊?guó)藥典

2、》（2005版）規(guī)定其塊根入藥，具有順氣止痛、溫腎散寒等功效，臨床上被廣泛用于治療寒凝氣滯所致脘腹疼痛，中成藥配伍廣泛。據(jù)報(bào)道烏藥葉中黃酮資源豐富，為烏藥葉中抗菌、抗炎的主要成分［1,2］。關(guān)于應(yīng)用紫外-可見光分光光度法測(cè)定其他植物中總黃酮的含量已有相關(guān)報(bào)道［3～6］，具有操作簡(jiǎn)單、數(shù)據(jù)可靠等優(yōu)點(diǎn)；但是關(guān)于用分光光度法分析烏藥葉中總黃酮的含量尚未見相關(guān)的報(bào)道。為更好地開發(fā)利用烏藥葉資源，本文建立了聚酰胺吸附－鋁離子顯色法，對(duì)烏藥葉中總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定?！　?儀器與材料　　1.1儀器UV2401PC型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；RE52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上

3、海亞榮生化儀器廠）；FA2004A型電子天平（上海精天電子儀器有限公司）；SB80超聲波清洗機(jī)（寧波江南藥廠）?！　?.2試劑無(wú)水乙醇、甲醇（分析級(jí)AR，宜興市展望化工試劑廠），石油醚（沸程60～90℃，上海試劑二廠）；聚酰胺（浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠）；AlCl3·6H2O（分析級(jí)AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0080-9705）?！　?.3樣品烏藥樣地設(shè)在浙江省天臺(tái)縣三州鄉(xiāng)。200610在樣地隨機(jī)選取植株，用濕布包裹，塑料袋封裝，立即帶回實(shí)驗(yàn)室。將材料洗凈，自然風(fēng)干，70℃下干燥12h，研磨后過(guò)金屬網(wǎng)篩，將

4、烘干樣品放入到干燥器中保存，備用?！　?方法與結(jié)果　　2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.025g，置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得濃度為1.0mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液?！　?.2供試品溶液的制備精密稱取烏藥葉粉末1.0g，置250ml三頸燒瓶中，用50%乙醇水浴加熱（85℃）回流3次，每次溶劑100ml，回流時(shí)間1h，合并提取液，減壓蒸餾除去溶劑，用甲醇溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0ml。然后，加入10ml水，用石油醚（60～90℃）萃取3次，每次用量為30ml。萃取液經(jīng)減壓蒸餾除去甲醇后，過(guò)聚酰胺柱，用95%乙醇洗脫至無(wú)黃酮類物質(zhì)為止。洗脫液減壓

5、濃縮，除去溶劑，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，備用?！　?.3測(cè)定波長(zhǎng)的確定精密移取1ml供試品溶液于10ml容量瓶中，加入4ml1%氯化鋁甲醇溶液，然后用甲醇定容至10ml。同法，制得空白，在200～600nm進(jìn)行掃描，記錄紫外吸收光譜，見圖1。　　從圖1可以看出供試品溶液在225，275nm和420nm有吸收峰。由于420nm干擾較小，因此確定檢測(cè)波長(zhǎng)為420nm。　　2.4顯色時(shí)間的確定精密移取1ml供試品溶液于10ml容量瓶中，加入4ml1%氯化鋁甲醇溶液，然后用甲醇定容至10ml。每隔1min于420nm處測(cè)定其吸光度。結(jié)果表明，供試品溶液顯色15m

6、in后，吸光度幾乎維持穩(wěn)定。　　圖1樣品的紫外吸收光譜圖（略）　　2.5聚酰胺用量的考察取適量聚酰胺粉末用95%乙醇煮沸30min后抽濾，如此重復(fù)3次。將最后抽干的粉末先置于室溫下自然干燥30min，然后放入烘箱70℃下干燥1h?！　》謩e稱取0.15，0.30，0.45，0.60，0.90g聚酰胺粉，以95%乙醇作流動(dòng)相，裝入層析柱中，加入黃酮提取液，以10～15倍95%乙醇洗脫，采用鋁離子顯色反應(yīng)檢測(cè)出口流出液。將流出液濃縮用甲醇定容至50ml，用紫外測(cè)定其吸光值變化。結(jié)果表明當(dāng)聚酰胺用量超過(guò)0.45g之后，吸光度變化不大?！　?.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取蘆丁對(duì)照

7、品溶液0.2，0.5，1.0，5.0，10ml置于10ml容量瓶中，甲醇定容。分別移取1ml溶液，分別置于10ml容量瓶中，加入4ml1%的氯化鋁－甲醇溶液，用甲醇定容至刻度線，搖勻，放置15min。同法制得空白液，按分光光度法，在420nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光值。以吸光值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液得濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為：A＝7.0592C－0.0066，相關(guān)系數(shù)r＝0.9995。結(jié)果表明，蘆丁對(duì)照品在所試濃度0.002～0.10mg/ml內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?！　?.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液按上述方法連續(xù)檢測(cè)6次，RSD＝0.24%，可見該方