資源描述：
《楮頭紅多糖的分離純化與生物活性檢驗(yàn)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、楮頭紅多糖的分離純化與生物活性檢驗(yàn)作者：何海斌，朱慶銀，陳強(qiáng)，林茹，李清祿【摘要】目的從藥用植物楮頭紅中分離純化多糖成分并驗(yàn)證其生物活性。方法用熱水提取，乙醇沉淀提取粗多糖，再經(jīng)Sevag法去除蛋白，透析去除小分子物質(zhì)，冷凍干燥得楮頭紅多糖粗品；采用DEAE-52纖維素柱層析和SephadexG-200凝膠柱層析進(jìn)行分離純化；用TBA法考察多糖的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用；采用CCl4急性肝損傷模型，測(cè)定其血清中AST變化。結(jié)論獲得一個(gè)楮頭紅多糖組分。TBA法表明該組分對(duì)小鼠自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化具有顯著的抑制
2、作用；在保肝試驗(yàn)中，給藥組能明顯抑制AST的升高，對(duì)肝損傷有一定的保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】楮頭紅多糖；分離；純化；生物活性crudeproductofS.nepalensisatography.Theinhibiteffectofthepolysaccharideonlipidperoxidationofmiceliverethod.Themodelofliver-injuryinducedbycarbontetrachloride（CCl4)arkablyinhibitlipidperoxidat
3、ionofratliverandsignificantlyreduceactivityofAST.【Keyan）、sephadexG-200填料（Pharmacia）、透析袋（3500）、聯(lián)苯雙酯滴丸（北京協(xié)和藥廠）；石油醚（沸程60～90℃）、95%乙醇、無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮、98%濃硫酸、氯仿、氯化鈉、氫氧化鈉、正丁醇等，均為分析純。1.3楮頭紅粗多糖的提取1.3.1楮頭紅多糖的提?。?，5］楮頭紅全草用蒸餾水洗滌去土，40℃低溫干燥、粉碎。稱取草藥250g,用石油醚80℃回流脫脂2次，之后
4、用95%乙醇除小分子單糖，濾渣揮去酒精，晾干后于90℃回流提取3次，每次2h，合并濾液，離心去除不溶物。濾液加0.1%的活性炭60℃保溫30min，不斷攪拌脫色，過(guò)濾，取上清液放入-40℃冰箱過(guò)夜，第二天取出自然融化后離心（5000r/min）去除不溶物。上清液濃縮適當(dāng)?shù)捏w積后緩緩加入5倍量的95%乙醇沉淀，過(guò)濾，沉淀依次用95%的乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，重復(fù)3次。1.3.2除蛋白［9］用Sevag法脫蛋白，氯仿正丁醇4：1，多糖溶液和混合液的體積比為3：1，混合攪拌20～30min，充
5、分靜止分層除去白色沉淀，數(shù)次后直至界面無(wú)白色沉淀。1.3.3透析干燥多糖復(fù)溶后透析，透析在磁力攪拌下進(jìn)行，樣品液與透析液（蒸餾水）體積比為1：20，4h換一次水。將透析液進(jìn)行冷凍干燥后即得粗多糖。1.4楮頭紅粗多糖的純化分離［6～13］1.4.1DEAE-52柱層析DEAE-52填料依次用0.5mol/LNaOH、0.5mol/LHCl、0.5mol/LNaOH處理（每次30min），再以蒸餾水洗至中性后裝柱（柱尺寸為40cm×2.5cm）。裝柱后用蒸餾水平衡48h。將粗多糖溶于少量重蒸水（5～
6、8mg/ml），過(guò)柱，上樣量為交換容量的10%～20%。用水、0.1mol/LNaCl、0.5mol/LNaCl梯度洗脫，用自動(dòng)部分收集器每15min收集一管，每管5ml，硫酸苯酚法跟蹤檢測(cè)各主峰組分，將各主峰位分別收集合并，蒸餾水透析2天，冷凍干燥得楮頭紅多糖。1.4.2SephadexG-200柱層析將SephadexG-200填料加適量蒸餾水浸泡12h，100℃煮沸4h，脫氣后裝柱，用0.05mol/LNaCl平衡48h。將1.4.1中收集的各主峰組分進(jìn)一步純化，用0.05mol/LNaC
7、I洗脫，自動(dòng)部分收集器每30min收集一管，每管5ml，硫酸苯酚法跟蹤檢測(cè)。收集各主峰組分，冷凍干燥。1.4.3HPLC純度驗(yàn)證將多糖溶解成合適濃度，過(guò)0.45μm的濾膜后進(jìn)樣，進(jìn)樣體積20μl，流速1.0ml/min，示差檢測(cè)器檢測(cè)（檢測(cè)器溫度35℃），柱溫箱溫度35℃。1.5多糖的生物活性驗(yàn)證1.5.1小鼠肝自發(fā)性脂質(zhì)過(guò)氧化實(shí)驗(yàn)［14］小白鼠禁食18h，引頸法處死，迅速取出肝臟，用4℃下預(yù)冷的0.01mol/LPBS（pH為7.4）洗去表面殘血，濾紙吸干。用玻璃勻漿器將肝臟制成10%的肝勻漿
8、。取該勻漿1ml，加不同濃度的多糖溶液600ul，對(duì)照管不加樣品，用PBS作空白，于37℃溫育2h，加入20%三氯乙酸1ml終止反應(yīng)，3500r/min離心10min，取上清液2ml加入0.67%硫代巴比妥酸（TBA）1ml，90℃水浴15min，取出后流水冷卻。于532nm處測(cè)A值，以不加肝勻漿和樣液為比色空白樣（A0），以加肝勻漿不加樣品為對(duì)照樣（Ai），按下式計(jì)算脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）的清除率：LPO的清除率（%）=（A0-Ai）/A0×1001.5.2多糖保肝活性試驗(yàn)［15］取50只健康
