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《二十碳五烯酸對人肝癌hepg2凋亡細胞線粒體的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、二十碳五烯酸對人肝癌HepG2凋亡細胞線粒體的影響【關(guān)鍵詞】二十碳五烯酸；HepG2細胞；細胞凋亡；線粒體 EffectsofEicosapentaenoicacidonapoptosisandmitochondriainHepG2cells【Abstract】AIM:ToinvestigatethemitochondriachangesinhumanhepatoblastomaG2（HepG2）cellapoptosisinducedbyEIcosapentaenoicacid(EPA).METHODS:IntheHepG2cellsincubatedito
2、chondriafunctionandquantityinedethylthiazolyltetrazolium（MTT）colorimetricassayandfluorescenceprobe.TheexpressionandactivityofCaspase9easuredinHepG2cellapoptosisol/LEPA，HepG2cellsdisplayedtheapoptosisbytheDNAladderpattern;thenumberofthemitochondriaitochondriaitochondriamayplayagreatro
3、leintheHepG2cellapoptosisinducedbyEPA.【Keyitochondria【摘要】目的：探討二十碳五烯酸（EPA）誘導(dǎo)人肝癌HepG2細胞凋亡及其對線粒體的影響.方法：HepG2細胞與經(jīng)EPA處理后，DNALadder檢測細胞凋亡的發(fā)生，應(yīng)用線粒體熒光探針和四唑鹽（MTT）比色法分析細胞線粒體數(shù)量和功能，應(yīng)用免疫印跡法和特異性底物檢測HepG2細胞Caspase9蛋白酶的表達和活性.結(jié)果：終濃度為120μmol/LEPA處理HepG2細胞24h后，可以檢測到凋亡標志性的DNA梯形帶；細胞線粒體數(shù)量減少，MTT比色法檢測A值為0.1
4、73±0.065（P<0.01），提示線粒體功能降低；線粒體相關(guān)凋亡級聯(lián)反應(yīng)的啟動分子Caspase9蛋白表達增加，Caspase9酶活性增強至75.4±4.8，與未經(jīng)EPA處理HepG2細胞相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）.結(jié)論：EPA可能通過損傷線粒體誘導(dǎo)人肝癌HepG2細胞凋亡.【關(guān)鍵詞】二十碳五烯酸；HepG2細胞；細胞凋亡；線粒體二十碳五烯酸（eicosapentaenoicacid,EPA）屬于n3多不飽和脂肪酸（n3polyunsaturatedfattyacid，n3PUFA），主要存在于深海魚油中，是一類對人體有益的重要營養(yǎng)素.
5、近來的研究表明n3PUFA可以抑制腫瘤細胞增殖，具有一定的抗瘤功效［1］，其中誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡可能是主要機制之一［2］.有研究發(fā)現(xiàn)，EPA可以通過p53依賴，F(xiàn)as介導(dǎo)途徑誘導(dǎo)人肝癌HepG2細胞凋亡［3］.我們采用DNA梯形帶檢測,MTT比色法和激光掃描共聚焦顯微鏡檢測等方法，通過觀察EPA對體外培養(yǎng)的HepG2細胞凋亡和線粒體的影響，初步探討線粒體損傷在EPA誘導(dǎo)HepG2細胞凋亡過程中所發(fā)揮的作用，為進一步研究n3PUFA在抗腫瘤方面的功效提供一定的理論基礎(chǔ).1材料和方法1.1材料人肝癌HepG2細胞購自中國科學(xué)院上海生化與細胞所；DMEM培養(yǎng)基購自美國G
6、ibco公司；EPA，四唑鹽（MTT）購自美國Sigma公司；線粒體熒光探針MitoTrackerRed購自美國MolecularProbe公司；小鼠抗人Caspase9mAb為美國NeoMarker公司產(chǎn)品；Caspase9蛋白酶特異性底物AcLEHDAMC為美國Alexis公司產(chǎn)品.1.2方法1.2.1細胞培養(yǎng)與分組HepG2細胞常規(guī)培養(yǎng)于含有10mL/L小牛血清的DMEM培養(yǎng)液.試驗分為：處理組HepG2細胞于對數(shù)生長期應(yīng)用EPA（終濃度為120μmol/L培養(yǎng)液）處理24h后收獲；對照組采用正常培養(yǎng)未經(jīng)EPA處理的HepG2細胞.1.2.2DNA梯形帶法
7、檢測細胞凋亡細胞經(jīng)處理后收獲約1×106個細胞，PBS洗滌細胞2次，加150μLNP40裂解液裂解細胞5h，離心收集上清，150μLNP40細胞裂解液重復(fù)抽提沉淀1次，將上清置于等體積10g/LSDS溶液中并混勻，加入RNaseA（終濃度為2μg/mL），56℃孵育2h，加蛋白酶K至終濃度為2μg/mL，37℃水浴2h，加1/2體積的10mol/L醋酸銨和2倍體積的冰冷無水乙醇，-20℃過夜，4℃高速離心30s，棄上清，750mL/L冰冷乙醇漂洗沉淀，20μLTE緩沖液溶解DNA，取5μLDNA進行20g/L瓊脂糖凝膠電泳.1.2.3激光共聚焦顯微鏡檢測細胞線粒
8、體HepG2細胞制成細胞
