n乙酰半胱氨酸對(duì)急性肺損傷大鼠環(huán)氧合酶2的影響

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1、N乙酰半胱氨酸對(duì)急性肺損傷大鼠環(huán)氧合酶2的影響【摘要】目的：探討N乙酰半胱氨酸(NAC)對(duì)急性肺損傷(ALI)大鼠環(huán)氧合酶2(COX2)的影響,進(jìn)一步研究N乙酰半胱氨酸對(duì)急性肺損傷(ALI)肺組織的保護(hù)作用。方法：應(yīng)用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷(ALI)模型,然后應(yīng)用N乙酰半胱氨酸進(jìn)行干預(yù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、模型組、N乙酰半胱氨酸組，在肺損傷模型成功后24h處死大鼠,取左葉肺組織。采用免疫組化染色,檢測(cè)N乙酰半胱氨酸對(duì)急性肺損傷大鼠肺組織中COX2的表達(dá),利用HPIAS2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)定C

2、OX2在以上各組中表達(dá)的平均光密度和平均陽性面積率。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)對(duì)照組肺組織中COX2的表達(dá)較低；模型組肺組織中COX2的表達(dá)高；N乙酰半胱氨酸組肺組織中COX2表達(dá)較低。經(jīng)q檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與模型組之間，COX2的平均光密度及陽性面積率有顯著性差異(P＜0.01﹚，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與N乙酰半胱氨酸組之間，COX2的平均光密度及陽性面積率差異無顯著性(P＞0.05)。結(jié)論：N乙酰半胱氨酸可以減輕肺損傷的程度，對(duì)急性肺損傷組織具有重要的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】N乙酰半胱氨酸肺損傷環(huán)氧合酶2(COX2)　急性肺損

3、傷(acutelunginjury,ALI)是一種肺部過度炎癥反應(yīng),以肺泡毛細(xì)血管膜損傷、通透性增加、肺水腫,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和嚴(yán)重氣體交換障礙為主要特征［1］。N乙酰半胱氨酸(NAC)是左旋精氨酸的天然衍生物,是一種含活性巰基化合物［2］。近年國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果已經(jīng)證明,具有強(qiáng)大的抗氧化和細(xì)胞保護(hù)作用?！　〉嘘P(guān)NAC對(duì)急性肺損傷炎性細(xì)胞因子影響的研究尚少。我們應(yīng)用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷(ALI)模型,然后應(yīng)用NAC進(jìn)行干預(yù)，觀察急性肺損傷大鼠肺組織中COX2的表達(dá)，進(jìn)一步探討NAC在防治急性肺損傷中的

4、作用機(jī)制?！　?材料和方法　　1.1動(dòng)物模型制備及分組健康g/kg，n=20)、NAC組（于尾靜脈注射LPS前1h分別經(jīng)腹腔注射NAC(200mg/kg)，n=20）。稱重后,7%水合氯醛5ml/kg腹腔注射麻醉,仰臥固定,模型組消毒后經(jīng)頸外靜脈緩慢注射LPS2.5mg/kg。　　1.2動(dòng)物標(biāo)本制備將各組動(dòng)物處死，收集肺組織標(biāo)本，進(jìn)行組織學(xué)及免疫組織化學(xué)標(biāo)本制作。取材時(shí)間為L(zhǎng)PS注射后24h(T24)?！　?主要試劑濃縮型兔抗鼠COX2多克隆抗體(武漢博士德生物技術(shù)公司)；超敏即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒（福州

5、邁新生物有限公司）；顯色試盒及多聚賴氨酸（北京中山生物技術(shù)有限公司）?！　?.1主要儀器Y，常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；②3%過氧化氫，37℃孵育10min以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS洗4×5min；③COX2采用微波抗原修復(fù)（3檔，10min），采用高壓抗原修復(fù)PBS洗4×5min；④正常羊血清37℃孵育10min以減少非特異性反應(yīng)；⑤一抗37℃孵育1h，PBS洗4×5min；⑥生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑦鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶復(fù)合物37℃孵育10min，PBS洗4×5m

6、in；⑧DAB顯色液顯色，自來水沖洗終止反應(yīng)；⑨蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照?！　?.3免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷COX2相關(guān)抗原以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)。陰性對(duì)照除細(xì)胞核染成藍(lán)色外，胞漿內(nèi)無棕黃色反應(yīng)物。　　采用HPIAS2000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)（同濟(jì)千屏影像公司）對(duì)COX2的表達(dá)進(jìn)行定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)完整而不重疊的高倍鏡視野（×400），測(cè)定COX2每個(gè)視野下陽性反應(yīng)的平均光密度、陽性反應(yīng)面積和所有細(xì)胞總面積，計(jì)算陽性面積率。以每例5個(gè)視野的平均光密度

7、、陽性面積率的平均值作為該例的測(cè)量值（陽性面積率＝單位面積中陽性反應(yīng)的總面積/單位面積中細(xì)胞的總面積×100％）。.L.編輯。　　3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理對(duì)各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率作單因素方差分析和SNKq檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05?！　?結(jié)果COX2的表達(dá)：對(duì)照組肺組織內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒,COX2呈低表達(dá)；模型組肺組織內(nèi)可見密集分布的棕黃色顆粒,COX2呈高表達(dá)；NAC組肺肺組織內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒,COX2呈低表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示：對(duì)照組COX2表達(dá)的平均光密度為0.0851±

8、0.0332；模型組COX2表達(dá)的平均光密度為0.3349±0.0524；NAC組COX2表達(dá)的平均光密度為0.0765±0.0357。對(duì)照組COX2表達(dá)的陽性面積率0.0879±0.0223；模型組COX2表達(dá)的陽性面積率為0.2840±0.0457；NAC組COX2表達(dá)的陽性面積率為0.0942±0.0