n乙酰半胱氨酸對急性肺損傷大鼠環(huán)氧合酶2的影

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1、N乙酰半胱氨酸對急性肺損傷大鼠環(huán)氧合酶2的影【摘要】目的：探討N乙酰半胱氨酸(NAC)對急性肺損傷(ALI)大鼠環(huán)氧合酶2(COX2)的影響,進一步研究N乙酰半胱氨酸對急性肺損傷(ALI)肺組織的保護作用。方法：應用脂多糖(LPS)誘導大鼠急性肺損傷(ALI)模型,然后應用N乙酰半胱氨酸進行干預。實驗設對照組、模型組、N乙酰半胱氨酸組，在肺損傷模型成功后24h處死大鼠,取左葉肺組織。采用免疫組化染色,檢測N乙酰半胱氨酸對急性肺損傷大鼠肺組織中COX2的表達,利用HPIAS2000圖像分析系統(tǒng)測定COX2在以上各組中表達的

2、平均光密度和平均陽性面積率。結(jié)果：實驗對照組肺組織中COX2的表達較低；模型組肺組織中COX2的表達高；N乙酰半胱氨酸組肺組織中COX2表達較低。經(jīng)q檢驗，實驗對照組與模型組之間，COX2的平均光密度及陽性面積率有顯著性差異(P＜0.01﹚，實驗對照組與N乙酰半胱氨酸組之間，COX2的平均光密度及陽性面積率差異無顯著性(P＞0.05)。結(jié)論：N乙酰半胱氨酸可以減輕肺損傷的程度，對急性肺損傷組織具有重要的保護作用?！娟P鍵詞】N乙酰半胱氨酸肺損傷環(huán)氧合酶2(COX2)　急性肺損傷(acutelunginjury,ALI)是一種

3、肺部過度炎癥反應,以肺泡毛細血管膜損傷、通透性增加、肺水腫,炎性細胞浸潤和嚴重氣體交換障礙為主要特征［1］。N乙酰半胱氨酸(NAC)是左旋精氨酸的天然衍生物,是一種含活性巰基化合物［2］。近年國內(nèi)外大量實驗研究結(jié)果已經(jīng)證明,具有強大的抗氧化和細胞保護作用。　　但有關NAC對急性肺損傷炎性細胞因子影響的研究尚少。我們應用脂多糖(LPS)誘導大鼠急性肺損傷(ALI)模型,然后應用NAC進行干預，觀察急性肺損傷大鼠肺組織中COX2的表達，進一步探討NAC在防治急性肺損傷中的作用機制。　　1材料和方法　　1.1動物模型制備及分組健康g/kg，n=2

4、0)、NAC組（于尾靜脈注射LPS前1h分別經(jīng)腹腔注射NAC(200mg/kg)，n=20）。稱重后,7%水合氯醛5ml/kg腹腔注射麻醉,仰臥固定,模型組消毒后經(jīng)頸外靜脈緩慢注射LPS2.5mg/kg?！　?.2動物標本制備將各組動物處死，收集肺組織標本，進行組織學及免疫組織化學標本制作。取材時間為LPS注射后24h(T24)?！　?主要試劑濃縮型兔抗鼠COX2多克隆抗體(武漢博士德生物技術(shù)公司)；超敏即用型SP通用型免疫組織化學試劑盒（福州邁新生物有限公司）；顯色試盒及多聚賴氨酸（北京中山生物技術(shù)有限公司）。　　2.1主要儀器Y，常規(guī)脫

5、蠟至水，蒸餾水洗；②3%過氧化氫，37℃孵育10min以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS洗4×5min；③COX2采用微波抗原修復（3檔，10min），采用高壓抗原修復PBS洗4×5min；④正常羊血清37℃孵育10min以減少非特異性反應；⑤一抗37℃孵育1h，PBS洗4×5min；⑥生物素標記的二抗，37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑦鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶復合物37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑧DAB顯色液顯色，自來水沖洗終止反應；⑨蘇木精復染，脫水，透明，封片。用PBS代替一抗作為陰性對照?！　?.3免疫

6、組織化學結(jié)果判斷COX2相關抗原以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應。陰性對照除細胞核染成藍色外，胞漿內(nèi)無棕黃色反應物?！　〔捎肏PIAS2000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)（同濟千屏影像公司）對COX2的表達進行定量分析，每張切片隨機選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野（×400），測定COX2每個視野下陽性反應的平均光密度、陽性反應面積和所有細胞總面積，計算陽性面積率。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值（陽性面積率＝單位面積中陽性反應的總面積/單位面積中細胞的總面積×100％）?！　?.4統(tǒng)計學處理對各組免疫組

7、織化學反應陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率作單因素方差分析和SNKq檢驗，檢驗水準α為0.05?！　?結(jié)果COX2的表達：對照組肺組織內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒,COX2呈低表達；模型組肺組織內(nèi)可見密集分布的棕黃色顆粒,COX2呈高表達；NAC組肺肺組織內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒,COX2呈低表達。圖像分析結(jié)果顯示：對照組COX2表達的平均光密度為0.0851±0.0332；模型組COX2表達的平均光密度為0.3349±0.0524；NAC組COX2表達的平均光密度為0.0765±0.0357。對照組COX2表達的陽性面積率0.087

8、9±0.0223；模型組COX2表達的陽性面積率為0.2840±0.0457；NAC組COX2表達的陽性面積率為0.0942±0.0247。經(jīng)單因