不同濃度依托咪酯誘導(dǎo)人肝癌hepg2細(xì)胞體外凋亡的

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1、不同濃度依托咪酯誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞體外凋亡的依托咪酯可以直接抑制HL-60的細(xì)胞活性，并且誘發(fā)該細(xì)胞的凋亡，也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道依托咪酯對(duì)鼠肝線粒體能量代謝有影響，還有對(duì)肝臟缺血-再灌注損傷的保護(hù)均有作用[1-4]，那么依托咪酯是否也會(huì)直接誘發(fā)人肝癌HepG2細(xì)胞的凋亡呢？我們提出了該研究的假設(shè)。本文設(shè)計(jì)不同濃度的依托咪酯是否具有直接誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡的作用，2.1.1細(xì)胞凍存取1mL的胰酶消化2min后，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞從培養(yǎng)瓶表面貼壁沖洗下去，并懸浮于3mL的培養(yǎng)液中，用1000rpm離心5min，去上清液。將人肝癌HepG2細(xì)胞懸浮于1mL的凍存液中，調(diào)整細(xì)胞濃度至106/mL，

2、每個(gè)凍存管中加入1mL的細(xì)胞凍存液，放置-20℃冰箱內(nèi)保存2h，然后置于-80℃冰箱過(guò)夜。2.1.2細(xì)胞復(fù)蘇將凍存?zhèn)溆玫募?xì)胞，放入37℃的水浴箱內(nèi)融化復(fù)蘇。2.1.3細(xì)胞培養(yǎng)將人肝癌HepG2細(xì)胞放置于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3天傳代培養(yǎng)1次，細(xì)胞貼壁達(dá)到70%時(shí)，以0.25%胰酶消化，使細(xì)胞全部都浸于溶液，倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞變圓后，但尚未漂起時(shí)加入5mL培養(yǎng)液終止消化，然后分到另兩個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入新鮮培養(yǎng)基后再放置于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。2.1.4細(xì)胞傳代采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)狀況，當(dāng)生長(zhǎng)至80%以上時(shí)，用0.25%胰酶消

3、化進(jìn)行傳代，并置于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。4討論依托咪酯為臨床常用的一種麻醉劑，在靜脈麻醉過(guò)程中只需一次給藥就可以獲得很好的效果，但是依托咪酯所產(chǎn)生的毒性作用也是麻醉劑中獨(dú)有的，它可以促進(jìn)免疫細(xì)胞的凋亡。許多國(guó)內(nèi)學(xué)者研究依托咪酯誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用，從而分析依托咪酯的藥理學(xué)和臨床治療的意義。有研究表明[5-8]，小劑量依托咪酯對(duì)人急性髓性細(xì)胞白血病細(xì)胞具有一定的抑制作用。為探討不同濃度的依托咪酯是否具有直接誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的作用而進(jìn)行該試驗(yàn)。采用小劑量和大劑量的依托咪酯做細(xì)胞凋亡分析，綜合相關(guān)文獻(xiàn)，參照依托咪酯對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞凋亡影響的試驗(yàn)方法及藥物劑量規(guī)

4、格[9-12]，觀察該細(xì)胞正常時(shí)細(xì)胞凋亡情況，以及分別給予小劑量0.5g/mL，5g/mL的依托咪酯、大劑量50g/mL后12h、2h、48h依托咪酯時(shí)對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明依托咪酯誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞的凋亡具有一定的濃度-效應(yīng)與時(shí)間-效應(yīng)的關(guān)系，為依托咪酯開(kāi)辟臨床治療的新途徑。[