腺苷體外對人肝癌hepg2細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及其作用機(jī)制

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1、中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志２００８年６月；２２（３）：２０５－２１１ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００８Ｊｕｎ；２２（３）：２０５－２１１·２０５·腺苷體外對人肝癌ＨｅｐＧ２細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及其作用機(jī)制１２１１３吳靈飛，蘇劍東，李國平，蒲澤錦，馮家琳（汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院１．消化內(nèi)科，３．信息科，廣東汕頭５１５０４１；２．遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東珠海５１９１００）摘要：目的研究腺苷及其代謝途徑對人肝癌文章編號(hào)：１０００３００２（２００８）０３０２０５０７ＨｅｐＧ２細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及其機(jī)制。方法將ＤＯＩ：１０．３８６７／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００３０

2、０２．２００８．０３．００９－１腺苷２．０ｍｍｏｌ·Ｌ作用于ＨｅｐＧ２細(xì)胞２４和４８ｈ，采用流式細(xì)胞術(shù)（ＦＣＭ）測定細(xì)胞周期及凋亡率；觀手術(shù)切除是目前治療早期肝癌惟一有效的方察腺苷膜轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑雙嘧達(dá)莫、腺苷脫氨酶抑制法，但大多數(shù)患者就診時(shí)已達(dá)病程中晚期，手術(shù)療劑紅９（２羥基３壬烷基）腺嘌呤（ＥＨＮＡ）和腺苷效受限，因而尋找新的治療方法尤為重要。隨著對激酶抑制劑５′氨基５′脫氧腺苷（ＡＭＤＡ）對腺苷抑腫瘤發(fā)生機(jī)制的深入研究，探討誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡制細(xì)胞存活的影響，應(yīng)用ＭＴＴ法測定細(xì)胞存活率；的方法成為提高臨床療效的新思路。核苷類物質(zhì)的［１］應(yīng)用Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印跡法檢測Ｐ

3、５３和Ｂｃｌ２蛋白的細(xì)胞毒作用是近年的研究熱點(diǎn)，腺苷（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）表達(dá)。結(jié)果腺苷與ＨｅｐＧ２細(xì)胞作用２４和４８ｈ，［２］抗癌作用的研究結(jié)果更令人鼓舞，但是在不同的ＨｅｐＧ２細(xì)胞出現(xiàn)特征性的亞二倍體凋亡峰，細(xì)胞凋細(xì)胞株中其作用途徑不同，有些通過受體途徑介亡百分率分別由對照組的（１．２±０．４）％和（４．１±導(dǎo)［３］，有些則轉(zhuǎn)入胞內(nèi)起作用［２］。ＨｅｐＧ２細(xì)胞來源１．６）％增加到（２４．３±４．８）％和（３８．６±７．４）％，細(xì)于人肝癌組織，與正常肝細(xì)胞在細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)上胞周期阻滯于Ｇ０／Ｇ１期。腺苷與ＨｅｐＧ２細(xì)胞作用具有同源性。目前有關(guān)腺苷對ＨｅｐＧ２細(xì)胞生長抑２４ｈ明顯抑制

4、細(xì)胞存活，Ｐ５３表達(dá)明顯增強(qiáng)，Ｂｃｌ２制及凋亡的研究報(bào)道甚少。作者以往研究發(fā)現(xiàn)，４表達(dá)降低。預(yù)先分別給予雙嘧達(dá)莫，ＡＭＤＡ和種腺苷特異性或非特異性受體阻斷劑對ＨｅｐＧ２細(xì)ＡＭＤＡ＋雙嘧達(dá)莫處理后，各處理組ＨｅｐＧ２細(xì)胞存胞凋亡均無影響，腺苷膜轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑雙嘧達(dá)莫活率較腺苷組升高，細(xì)胞凋亡百分率和Ｐ５３表達(dá)降（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ，Ｄｉｐ）能明顯減少凋亡細(xì)胞的數(shù)量，表低，Ｂｃｌ２表達(dá)無明顯變化；ＥＨＮＡ預(yù)處理組細(xì)胞存明在ＨｅｐＧ２細(xì)胞腺苷是通過細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)到活率、細(xì)胞凋亡百分率、Ｐ５３和Ｂｃｌ２表達(dá)與腺苷組細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用［４］，但腺苷轉(zhuǎn)運(yùn)后與凋亡相關(guān)的代比較均無明顯變化。結(jié)

5、論腺苷可誘導(dǎo)ＨｅｐＧ２細(xì)謝途徑及機(jī)制尚不清楚。本研究觀察了膜轉(zhuǎn)運(yùn)體抑胞凋亡，腺苷在胞內(nèi)可能通過腺苷激酶而不是通過制劑Ｄｉｐ、腺苷脫氨酶抑制劑紅９（２羥基３壬烷轉(zhuǎn)氨酶的代謝途徑參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程。腺苷基）腺嘌呤〔ｅｒｙｔｈｒｏ９（２ｈｙｄｒｏｘｙｌ３ｎｏｎｙｌ）ａｄｅｎｉｎｅ，對ＨｅｐＧ２細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用還可能與其增加Ｐ５３ＥＨＮＡ〕和腺苷激酶抑制劑５′氨基５′脫氧腺苷（５′蛋白表達(dá)有關(guān)。ａｍｉｎｏ５′ｄｅｏｘｙａｄｅｎｏｓｉｎｅ，ＡＭＤＡ）體外預(yù)處理對腺關(guān)鍵詞：腺苷；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞周期；細(xì)胞，ＨｅｐＧ２苷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響，以探討腺苷代謝通路在腺苷誘導(dǎo)

6、細(xì)胞凋亡中的作用，以及腺苷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中圖分類號(hào)：Ｒ９７９．１的作用機(jī)制。文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ收稿日期：２００７１０２９接受日期：２００８０３０６１材料與方法基金項(xiàng)目：廣東省自然科學(xué)基金（６０３３５０８）１．１藥物、試劑及儀器作者簡介：吳靈飛（１９６４－），男，湖北省武漢市人，醫(yī)學(xué)碩士，主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤研究。ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ公司），９６孔和１２孔細(xì)胞培聯(lián)系作者Ｅｍａｉｌ：Ｌｉｎｇｆｅｉｗｕ＠２１ｃｎ．ｃｏｍＴｅｌ：養(yǎng)板（Ｃｏｓｔａｒ公司），小牛血清（杭州四季青生物工（０７５４）８９１５８１０Ｆａｘ：（０７５４）８３４６５４３程材料有限公司），噻唑藍(lán)（ＭＴ

7、Ｔ）、碘化丙啶（ｐｒｏ·２０６·ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００８Ｊｕｎ；２２（３）－１－１－１ｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）、ＥＨＮＡ、ＡＭＤＡ和腺苷（ＳｉｇｍａＬ，Ｄｉｐ２０μｍｏｌ·Ｌ＋ＡＭＤＡ１００μｍｏｌ·Ｌ預(yù)孵育公司），Ｐ５３和Ｂｃｌ２Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印跡法檢測試劑盒３０ｍｉｎ；對照組及腺苷組加入等體積０．１％ＤＭＳＯ。（ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司），硝酸纖維素膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司），另設(shè)培養(yǎng)液對照孔，加１