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1、奧沙利鉑對原發(fā)性肝癌細(xì)胞系HUH樸蓮淑王迎春大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院消化內(nèi)科，遼寧大連116001[摘要]目的探討奧沙利鉑對原發(fā)性肝癌細(xì)胞系HUH-7是否會(huì)產(chǎn)生作用和影響，根據(jù)其對抗腫瘤的效果決定是否能夠應(yīng)用于對肝癌細(xì)胞的臨床治療。方法把中科院2012年3月—2014年4月的肝癌細(xì)胞作為該試驗(yàn)的研究對象，用流式細(xì)胞儀器對癌細(xì)胞的分布周期和死亡狀況進(jìn)行分析，運(yùn)用MTT法測試不同濃度和不同的作用時(shí)間的奧沙利鉑對肝癌細(xì)胞增長繁殖的抑制效果。通過多次試驗(yàn)，得出最終結(jié)論。結(jié)果經(jīng)過48h作用后，癌細(xì)胞死亡率達(dá)到了11.8%，可見奧沙利鉑對于肝癌細(xì)胞的繁衍增長有
2、著很強(qiáng)的抑制功效，并且呈現(xiàn)出計(jì)量和時(shí)間的依賴性。結(jié)論奧沙利鉑對原生性肝癌細(xì)胞系HUH-7的抗瘤效果明顯，它可以抑制肝癌細(xì)胞繁殖，使細(xì)胞周期停留在S期和G2PM期之間，進(jìn)而使癌細(xì)胞死亡。但是其具體的運(yùn)行機(jī)制還有待研究，因而奧沙利鉑能否應(yīng)用于臨床治療還不能蓋棺定論。.jyqkL濃度的細(xì)胞液。并以200l1每孔的分量在96個(gè)培養(yǎng)板中進(jìn)行接種。培養(yǎng)條件為37℃、5%CO2，培養(yǎng)時(shí)間分別是1d、2d。達(dá)到培養(yǎng)時(shí)間后，再取出原液，加入一定比例的培養(yǎng)液繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。1.2.2檢測奧沙利鉑對癌細(xì)胞周期的作用的方法用流式細(xì)胞儀器進(jìn)行分析。把濃度為71%的乙醇加入
3、到取得的細(xì)胞中用PI進(jìn)行染色30min。并用流式細(xì)胞儀器分析細(xì)胞周期的變化和肝癌細(xì)胞的死亡狀況。1.2.3檢測奧沙利鉑對基因蛋白的影響的方法用免疫組織化學(xué)方法，對細(xì)胞株進(jìn)行特殊培養(yǎng)，觀察其染色情況，按公式計(jì)算出相應(yīng)的HSCORE得分。1.3統(tǒng)計(jì)方法用SPSS14.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，用方差齊性檢驗(yàn)（F)檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[1]。2結(jié)果2.1奧沙利鉑對細(xì)胞的作用奧沙利鉑能夠有效抑制肝癌細(xì)胞的增長，而且對劑量有很強(qiáng)的依賴作用，藥物的濃度越高，抑制作用越強(qiáng)；對時(shí)間也有依賴作用，抑制作用隨著藥物作用時(shí)
4、間的增長而增長。即奧沙利鉑的濃度不同或者時(shí)間作用不同對肝癌細(xì)胞產(chǎn)生的影響程度也不同。見表1。2.2奧沙利鉑對細(xì)胞株周期和死亡情況的影響奧沙利鉑對肝癌細(xì)胞作用時(shí)間達(dá)到24h后，癌細(xì)胞周期基本都停在了S周期；在作用時(shí)間達(dá)到48h后，細(xì)胞周期就被迫停在了S期和G2PM期之間，但仍主要在停在S期。而且奧沙利鉑作用于肝癌細(xì)胞24h、48h后，肝癌細(xì)胞死亡率分別是6.27%、11.8%，由此可見，隨著奧沙利鉑作用時(shí)間的增長，肝癌細(xì)胞的死亡率也在增長。2.3奧沙利鉑對相關(guān)基因蛋白的影響使用奧沙利鉑后，CyclinA定位在胞核中;MTP53陽性表達(dá)見于胞核;B
5、c-l2、Bax及Fas定位在胞漿中;Myc的陽性表達(dá)于胞漿和胞核可見。奧沙利鉑作用于癌細(xì)胞72h后,免疫細(xì)胞化學(xué)表CyclinA、Bax表達(dá)增強(qiáng)(P<0.03),MTP53、Bc-l2及Myc表達(dá)減弱(P<0.02),Fas表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.06)。見表2。3討論在該研究中，采取了兩種方法對奧沙利鉑對癌細(xì)胞的作用進(jìn)行了研究，有兩個(gè)重大發(fā)現(xiàn)：一是藥物作用于癌細(xì)胞48h后，將癌細(xì)胞阻斷在S期和G2PM期之間，使癌細(xì)胞死亡率達(dá)到了11.8%；二是奧沙利鉑濃度為16mol/L作用24h影響為（0.1898±0.056），
6、濃度為升為128mol/L作用48h影響升為了（0.8176±0.0414）。實(shí)驗(yàn)表明：奧沙利鉑對癌細(xì)胞有影響，能夠?qū)⒏伟┘?xì)胞全部停留在S期和G2PM期之間，并逐步產(chǎn)生作用，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞走向凋亡。且奧沙利鉑對肝癌細(xì)胞起的作用大小呈現(xiàn)出對劑量、時(shí)間的依賴性。大量歷史資料[2-3]表明：很多抗癌的藥品不會(huì)直接消滅肝癌細(xì)胞而是通過誘導(dǎo)機(jī)制使其逐步走向死亡，因?yàn)榭拱┧幬镌谙麥绨┘?xì)胞的同時(shí)可能會(huì)對正常的細(xì)胞產(chǎn)生不良作用。因而，研究新型的能誘導(dǎo)癌細(xì)胞自動(dòng)凋亡的抗癌藥物是現(xiàn)代抗癌治療的新渠道。而奧沙利鉑是第3代鉑化合物，它能夠中斷DNA的合成，從而使癌細(xì)胞失
7、去存活、增殖的基礎(chǔ)，有效抑制癌細(xì)胞增長，誘導(dǎo)其凋亡。實(shí)驗(yàn)證明，奧沙利鉑可以應(yīng)用于肝癌的臨床治療，而且能夠取得很好的效果，是未來抗癌的一種重要的藥物。進(jìn)一步對其進(jìn)行開發(fā)研究，進(jìn)行更多的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，使其得到廣泛的臨床應(yīng)用是醫(yī)學(xué)界的重要課題。..
