薄層色譜法鑒別康腎顆粒中茜草研究

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1、薄層色譜法鑒別康腎顆粒中茜草研究周翠蘭曾曉燕姚遠(yuǎn)忠廣州一品紅制藥有限公司，廣東廣州510760簡(jiǎn)介：周翠蘭（1978-），女，碩士研究生，執(zhí)業(yè)藥師，從事新藥研發(fā)工作?！菊磕康模航⒖的I顆粒中茜草的薄層色譜定性鑒別方法，為將茜草鑒別納入其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：采用薄層色譜法對(duì)康腎顆粒中茜草進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：在薄層色譜中，供試品溶液在與對(duì)照藥材及對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論：本薄層色譜鑒別方法驗(yàn)證結(jié)果較好，專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性、耐用性好，可用于康腎顆粒的質(zhì)量控制。.jyqkl，超聲處理30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml、鹽酸2m

2、l，加熱20min，放冷，用乙酸乙酯20ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。2.2陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例稱取除茜草之外的其它藥材，照康腎顆粒的制備工藝制成缺茜草空白顆粒，取缺茜草空白顆粒12g，照上述供試品溶液的制備方法同法制備成陰性對(duì)照溶液。2.3對(duì)照藥材溶液的制備取茜草對(duì)照藥材0.5g，照上述供試品溶液的制備方法同法處理，作為對(duì)照藥材溶液。2.4對(duì)照品溶液的配制取大葉茜草素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。2.5TLC鑒別照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB）試驗(yàn)［2］，吸取對(duì)照品、對(duì)

3、照藥材溶液各2μl，陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（10∶2∶1∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。2.6方法驗(yàn)證2.6.1專屬性照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，采用缺茜草陰性對(duì)照、對(duì)照品、對(duì)照藥材進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，本法專屬性較好。2.6.2靈敏度照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，比較供試品不同點(diǎn)樣量（1、2、5、10、15、20μl）對(duì)斑點(diǎn)的影響。結(jié)果隨著點(diǎn)樣量的增加，斑點(diǎn)的清晰度增加，點(diǎn)樣1μl也能檢

4、出，但斑點(diǎn)非常模糊，點(diǎn)樣5μl以上斑點(diǎn)明顯，點(diǎn)樣到20μl薄層板有點(diǎn)超載，但斑點(diǎn)未拖尾，結(jié)果表明本方法靈敏度較好，點(diǎn)樣量可以選擇5~10μl。實(shí)驗(yàn)選擇的是普通薄層板，使用高效板可減少點(diǎn)樣量。2.6.3重現(xiàn)性照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，同時(shí)點(diǎn)樣三個(gè)批號(hào)（批號(hào)：20140603、20140604、20140605）的樣品，結(jié)果三批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，本法重現(xiàn)性較好。2.6.4耐用性2.6.4.1不同廠家的薄層板考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，采用兩個(gè)不同廠家的硅膠G薄層板及自制板進(jìn)行點(diǎn)樣，結(jié)果顯示不同廠家的薄層

5、板Rf值有所差異，但不影響薄層鑒別。2.6.4.2不同相對(duì)濕度考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，平行點(diǎn)樣四個(gè)薄層板，分別在RH18%、RH42%、RH65%、RH88%四個(gè)相對(duì)濕度條件下展開(kāi)，比較TLC圖譜的差異，結(jié)果RH18%~88%范圍內(nèi)檢視結(jié)果良好，故常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下相對(duì)濕度對(duì)此鑒別試驗(yàn)沒(méi)有影響。2.6.4.3不同溫度的考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，平行點(diǎn)樣三個(gè)薄層板，分別在5、25、35℃三個(gè)溫度條件下展開(kāi)，比較TLC圖譜的差異，結(jié)果顯示環(huán)境溫度5~35℃不影響本品薄層鑒別。2.6.4.4檢視時(shí)間的考察文獻(xiàn)報(bào)道［4］，甲醇溶液中大葉茜草素在光照條件下含量明顯下降，因

6、此在薄層板展開(kāi)晾干之后，在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)光照環(huán)境下，在0min、30min、1h、2h四個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)觀察了熒光強(qiáng)度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的變化，大葉茜草素的熒光強(qiáng)度下降，斑點(diǎn)顏色變淡，展開(kāi)晾干后2h對(duì)照品斑點(diǎn)顏色明顯變淡，供試品已經(jīng)觀察不到斑點(diǎn)。故建議樣品配制后置于棕色試劑瓶中避光保存，薄層板晾干之后即刻觀察。2.7結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，色譜圖見(jiàn)圖1。3討論康腎顆粒處方由12味中藥組成，組分復(fù)雜，影響鑒別的干擾因素較多，樣品的處理方法非常重要。試驗(yàn)甲醇提取、乙酸乙酯提取多種方法，最后確定采用甲醇提取，再乙酸乙酯萃取。采用茜草對(duì)照藥

7、材、大葉茜草素對(duì)照品作為對(duì)照，對(duì)不同展開(kāi)劑進(jìn)行了篩選：（1）石油醚-丙酮（5∶1）；（2）乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（10∶28∶1∶0.5）；（3）二氯甲烷-乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（20∶10∶8∶1∶0.5）。結(jié)果展開(kāi)劑（2）操作方便，斑點(diǎn)分離清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾。研究結(jié)果表明，所建立的薄層色譜鑒別方法對(duì)康腎顆粒中茜草的定性鑒別專屬性強(qiáng)，提取方法和展開(kāi)效果良好，方法靈敏度高，重現(xiàn)性、耐用性均達(dá)到鑒別檢驗(yàn)要求，可較好地用于康腎顆粒的質(zhì)量控制。本