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《bfgf對兔骨髓基質(zhì)細胞vegf因子表達及細胞生物行為的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、bFGF對兔骨髓基質(zhì)細胞VEGF因子表達及細胞生物行為的影響作者：常祺劉建胡蘊玉孟國林白建萍彭磊【關(guān)鍵詞】血管內(nèi)皮細胞生長因子 EffectofbFGFonVEGFexpressionandbiologicalbehaviorofmarroalcells 【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofbasicfibroblastgroarroalcells.METHODS:Themarroalcellsofthefemurofrabbitsplesultiplication,alkali
2、nephosphataseactivitiesdetection,theputeranalysisofboneclustersandthedetectionofratioofVEGFpositivecells.RESULTS:TheresandtheresultsoftreatmentgroupsulateboththemultiplicationandosteogenicpotentialofmarroalcellsinadosedependentmannerandthebestdoseofbFGFis1200kU
3、539;L-1. 【Keyarroalcell 【摘要】目的：觀察兔骨髓基質(zhì)細胞經(jīng)bFGF刺激后，其VEGF因子表達及細胞生物行為的變化.方法：取兔雙側(cè)股骨骨髓基質(zhì)細胞，采用骨髓基質(zhì)細胞體外培養(yǎng)技術(shù)，分別以不同劑量bFGF刺激細胞，并設(shè)立空白對照組.培養(yǎng)5d后，進行細胞形態(tài)（HE染色）、增殖情況（細胞記數(shù)法與MTT法）、堿性磷酸酶（改良鈣鈷法染色）、成骨結(jié)節(jié)（圖像分析）、VEGF陽性細胞率（免疫組化染色）等項目的檢測.結(jié)果：不同劑量組間各項觀測指標差異均顯著，結(jié)果均優(yōu)于空白對照組.bFGF促進細胞增殖與VEGF表達最佳劑
4、量為1200kU・L1.結(jié)論：bFGF能促進骨髓基質(zhì)細胞增殖，促進VEGF的表達，其劑量與效果間存在明顯相關(guān)關(guān)系.bFGF為1200kU・L-1時，促進骨髓基質(zhì)細胞表達VEGF及促進細胞增殖作用同時達到最佳效果. 【關(guān)鍵詞】血管內(nèi)皮細胞生長因子；堿性成纖維細胞生長因子；骨髓基質(zhì)細胞 0引言 組織工程骨的再血管化問題一直阻礙著組織工程技術(shù)在骨科領(lǐng)域的發(fā)展.血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是機體內(nèi)促進血管生長最重要的生長因子，在骨的形成及修復(fù)中也起到重要的作用，其表達水平直接影響到以后成骨的血供，影
5、響到成骨的速度和質(zhì)量［1,2］.骨髓基質(zhì)細胞是骨組織工程中一種常用的種子細胞，骨髓基質(zhì)細胞中所包含的許多細胞，如內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、巨嗜細胞等都可分泌表達VEGF.如何刺激骨髓基質(zhì)細胞，促進VEGF的分泌則成為增加VEGF表達的另一重要手段.我們采用不同劑量bFGF刺激體外培養(yǎng)的兔骨髓基質(zhì)細胞，觀察其VEGF因子表達改變，并參照細胞生物行為的變化，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù). 1材料和方法 1.1材料幼兔1a公司，bFGF試劑購自雙鷺公司，VEGFmAb及SP試劑盒購自邁新公司.骨髓基質(zhì)細胞原代培養(yǎng)：取幼兔殺死，在無菌條件
6、下取出雙側(cè)股骨和肱骨，去除骨外膜，DMEM液沖洗3次，用注射器反復(fù)沖洗骨髓腔，沖出的骨髓細胞接種于裝有適量培養(yǎng)液（DMEM培養(yǎng)基，含100mL・L-1胎牛血清）的培養(yǎng)瓶中，置于50mL・L-1CO2培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)，24h后吸出懸浮細胞，用DMEM液沖洗后，留下貼壁細胞繼續(xù)培養(yǎng).而后隔日換液，觀察細胞生長情況.細胞融合成片，長滿培養(yǎng)瓶底部后，用2.5g・L-1胰蛋白酶消化，傳代培養(yǎng). 1.2方法將bFGF試劑溶解于DMEM中，針頭濾器過濾除菌.第4代細胞傳代后，分別用含bFG
7、F0，200，400，600，800，1000，1200和1600kU・L-1的血清培養(yǎng)液培養(yǎng)，同時分組.取第4代骨髓基質(zhì)細胞，以消化法傳代后，按以上分組方法加入不同劑量bFGF達到預(yù)期濃度，調(diào)整細胞密度至1×107L-1，接種于50mL培養(yǎng)瓶.置于37℃、飽和濕度、50mL・L-1CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng).隔日換液.每4～6h在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài).另取第4代細胞，傳代后調(diào)整細胞密度至1×107L-1，接種于50mL培養(yǎng)瓶（瓶中預(yù)先置入蓋玻片），培養(yǎng)4d后，取出蓋玻片，PBS沖洗3次，750mL&
8、#12539;L-1乙醇固定，行HE染色(Fig1).取第4代骨髓基質(zhì)細胞，以消化法傳代后，按以上分組方法加入不同劑量bFGF，調(diào)整細胞密度至1×107L-1，接種于24孔培養(yǎng)板內(nèi)，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)，隔日換液.細胞培養(yǎng)5d后以胰蛋白酶消化，用細胞記數(shù)板記數(shù)細胞，每孔重復(fù)3次，取均值.細胞培養(yǎng)
