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《bfgf對兔骨髓基質(zhì)細胞vegf因子表達及細胞生物行為的影響》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、bFGF對兔骨髓基質(zhì)細胞VEGF因子表達及細胞生物行為的影響作者:常祺劉建胡蘊玉孟國林白建萍彭磊【關(guān)鍵詞】血管內(nèi)皮細胞生長因子 EffectofbFGFonVEGFexpressionandbiologicalbehaviorofmarroalcells 【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofbasicfibroblastgroarroalcells.METHODS:Themarroalcellsofthefemurofrabbitsplesultiplication,alkali
2、nephosphataseactivitiesdetection,theputeranalysisofboneclustersandthedetectionofratioofVEGFpositivecells.RESULTS:TheresandtheresultsoftreatmentgroupsulateboththemultiplicationandosteogenicpotentialofmarroalcellsinadosedependentmannerandthebestdoseofbFGFis1200kU
3、539;L-1. 【Keyarroalcell 【摘要】目的:觀察兔骨髓基質(zhì)細胞經(jīng)bFGF刺激后,其VEGF因子表達及細胞生物行為的變化.方法:取兔雙側(cè)股骨骨髓基質(zhì)細胞,采用骨髓基質(zhì)細胞體外培養(yǎng)技術(shù),分別以不同劑量bFGF刺激細胞,并設(shè)立空白對照組.培養(yǎng)5d后,進行細胞形態(tài)(HE染色)、增殖情況(細胞記數(shù)法與MTT法)、堿性磷酸酶(改良鈣鈷法染色)、成骨結(jié)節(jié)(圖像分析)、VEGF陽性細胞率(免疫組化染色)等項目的檢測.結(jié)果:不同劑量組間各項觀測指標差異均顯著,結(jié)果均優(yōu)于空白對照組.bFGF促進細胞增殖與VEGF表達最佳劑
4、量為1200kU・L1.結(jié)論:bFGF能促進骨髓基質(zhì)細胞增殖,促進VEGF的表達,其劑量與效果間存在明顯相關(guān)關(guān)系.bFGF為1200kU・L-1時,促進骨髓基質(zhì)細胞表達VEGF及促進細胞增殖作用同時達到最佳效果. 【關(guān)鍵詞】血管內(nèi)皮細胞生長因子;堿性成纖維細胞生長因子;骨髓基質(zhì)細胞 0引言 組織工程骨的再血管化問題一直阻礙著組織工程技術(shù)在骨科領(lǐng)域的發(fā)展.血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是機體內(nèi)促進血管生長最重要的生長因子,在骨的形成及修復(fù)中也起到重要的作用,其表達水平直接影響到以后成骨的血供,影
5、響到成骨的速度和質(zhì)量[1,2].骨髓基質(zhì)細胞是骨組織工程中一種常用的種子細胞,骨髓基質(zhì)細胞中所包含的許多細胞,如內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、巨嗜細胞等都可分泌表達VEGF.如何刺激骨髓基質(zhì)細胞,促進VEGF的分泌則成為增加VEGF表達的另一重要手段.我們采用不同劑量bFGF刺激體外培養(yǎng)的兔骨髓基質(zhì)細胞,觀察其VEGF因子表達改變,并參照細胞生物行為的變化,為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù). 1材料和方法 1.1材料幼兔1a公司,bFGF試劑購自雙鷺公司,VEGFmAb及SP試劑盒購自邁新公司.骨髓基質(zhì)細胞原代培養(yǎng):取幼兔殺死,在無菌條件
6、下取出雙側(cè)股骨和肱骨,去除骨外膜,DMEM液沖洗3次,用注射器反復(fù)沖洗骨髓腔,沖出的骨髓細胞接種于裝有適量培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)基,含100mL・L-1胎牛血清)的培養(yǎng)瓶中,置于50mL・L-1CO2培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng),24h后吸出懸浮細胞,用DMEM液沖洗后,留下貼壁細胞繼續(xù)培養(yǎng).而后隔日換液,觀察細胞生長情況.細胞融合成片,長滿培養(yǎng)瓶底部后,用2.5g・L-1胰蛋白酶消化,傳代培養(yǎng). 1.2方法將bFGF試劑溶解于DMEM中,針頭濾器過濾除菌.第4代細胞傳代后,分別用含bFG
7、F0,200,400,600,800,1000,1200和1600kU・L-1的血清培養(yǎng)液培養(yǎng),同時分組.取第4代骨髓基質(zhì)細胞,以消化法傳代后,按以上分組方法加入不同劑量bFGF達到預(yù)期濃度,調(diào)整細胞密度至1×107L-1,接種于50mL培養(yǎng)瓶.置于37℃、飽和濕度、50mL・L-1CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng).隔日換液.每4~6h在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài).另取第4代細胞,傳代后調(diào)整細胞密度至1×107L-1,接種于50mL培養(yǎng)瓶(瓶中預(yù)先置入蓋玻片),培養(yǎng)4d后,取出蓋玻片,PBS沖洗3次,750mL&
8、#12539;L-1乙醇固定,行HE染色(Fig1).取第4代骨髓基質(zhì)細胞,以消化法傳代后,按以上分組方法加入不同劑量bFGF,調(diào)整細胞密度至1×107L-1,接種于24孔培養(yǎng)板內(nèi),放置于培養(yǎng)箱內(nèi),隔日換液.細胞培養(yǎng)5d后以胰蛋白酶消化,用細胞記數(shù)板記數(shù)細胞,每孔重復(fù)3次,取均值.細胞培養(yǎng)