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《補腎通絡中藥對類風濕性關節(jié)炎foxp3表達的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、補腎通絡中藥對類風濕性關節(jié)炎Foxp3表達的影響【摘要】目的：觀察補腎通絡中藥對類風濕性關節(jié)炎患者Foxp3表達的影響。方法：隨機選擇來我院健康體檢者30例為對照組，同時選擇我院門診類風濕性關節(jié)炎患者50例為治療組。治療組患者（初治/或經(jīng)過兩周的清除期）內(nèi)服補腎通絡方3個月后，提取所有受試者外周血總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后采用實時熒光定量PCR法檢測對照組和治療組治療前后Foxp3mRNA的含量。結(jié)果：治療組治療前后外周血Foxp3表達水平均明顯低于對照組（P＜0.01），治療組治療后外周血Foxp3表達水平亦明顯高于治療前（P
2、＜0.01）。結(jié)論：類風濕性關節(jié)炎患者存在表達Foxp3的調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量減少和/或功能降低，這種調(diào)節(jié)性T細胞亞群的異?？赡軈⑴c了類風濕性關節(jié)炎的發(fā)病和病變進展，補腎通絡中藥治療類風濕性關節(jié)炎可能是通過上調(diào)Foxp3表達而發(fā)揮作用?！娟P鍵詞】類風濕性關節(jié)炎補腎通絡中藥Foxp3mRNA實時熒光定量PCR法β2m調(diào)節(jié)免疫功能類風濕性關節(jié)炎（RheumatoidArthritis，RA）是一種以慢性破壞性關節(jié)炎為主要特征的系統(tǒng)性自身免疫疾病。RA源于免疫平衡失調(diào)，機體通過多種機制調(diào)控自身免疫應答，其機制十分復雜，調(diào)節(jié)性T細胞在免疫平衡
3、機制方面起著重要作用，但其在RA發(fā)病機制中的作用尚不清楚。本研究對中藥治療RA后外周血調(diào)節(jié)性T細胞的特異性標志Foxp3進行測定，探討Foxp3在RA發(fā)病中的意義，探討中藥調(diào)控T細胞介導RA適應性免疫應答的機制，為RA發(fā)病機制及用補腎通絡中藥防治RA提供理論依據(jù)。1資料與方法1.1臨床資料隨機選取來我院體檢的30例健康者作為正常對照組（對照組），同時選擇我院門診50例RA患者作為治療組。對照組中男12例，女18例；年齡最小15歲，最大57歲，平均（52.19±10.50）歲；治療組中男18例，女32例；年齡最小13歲，最大61歲，
4、平均（51.21±11.73）歲；病程最短3年，最長15年，平均（7.5±2.6）年。所有RA病例均符合美國風濕病學會1987年的類風濕性關節(jié)炎分類診斷標準［1］。1.2治療方法治療組（初治/或經(jīng)過2L。采用淋巴細胞分離液（天津灝洋生物制品有限公司生產(chǎn)）分離外周血單個核細胞，利用Trizol（美國Invitrogen公司生產(chǎn)）一步法提取外周血單個核細胞總RNA，取總RNA2μg進行逆轉(zhuǎn)錄反應合成cDNA，-80℃保存。1.3.2 Foxp3定量標準品的構(gòu)建取上述cDNA2μL，進行PCR擴增。Foxp3引物（上海博亞公司合成）：5
5、′-TCAAGCACTGCCAGGCG-3′和5′-CAGGAGCCCTTGTCGTCGGAT-3′。將PCR產(chǎn)物插入pgM-T載體（北京天為時代公司生產(chǎn)），并轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌TOP10（北京天為時代公司生產(chǎn)），經(jīng)藍白斑篩選獲得陽性克隆，測序鑒定目的片段插入正確。抽提質(zhì)粒，并進行1∶10倍比稀釋，制成107ng/mL、106ng/mL、105ng/mL、104ng/mL和103ng/mL共5個標準品，分裝后-20℃保存。1.3.3 外參照β2m定量標準品的構(gòu)建 取上述cDNA2μL，進行PCR擴增。β2m引物（上海博亞公司合成）
6、：5′-CCAGCAGCGAATGGAAACTC-3′和5′-GATGCTGCTTACATGTCTCG-3′。余步驟同1.3.2。1.3.4 熒光定量PCR法檢測Foxp3mRNA相對含量取上述cDNA1μL，使用QuantSYBRgreenPCRkit（美國ABI公司生產(chǎn)）進行PCR擴增，終體積25μL。同時進行各自標準品的擴增，每個樣本均重復3復孔。PCR反應條件：50℃2min，95℃10min，擴增40個循環(huán)（95℃30秒，52℃30秒，72℃30秒）。為了消除樣本提取、逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應過程中造成的差異，以Foxp3mR
7、NA和β2mmRNA含量的比值，即Foxp3的相對表達水平，作為評價Foxp3表達水平的指標。1.4統(tǒng)計學方法結(jié)果采用SPSS10.0進行統(tǒng)計分析，各組間比較采用方差分析。2結(jié)果2.1療效標準參照國家中醫(yī)藥管理局1994年發(fā)布的《中醫(yī)病證診斷標準》類風濕性關節(jié)炎的療效評定標準［2］。痊愈：關節(jié)疼痛腫脹消失、晨僵消除；好轉(zhuǎn)：關節(jié)疼痛腫脹消失，偶有痛感，晨起稍有僵硬；無效：關節(jié)疼痛腫脹、晨僵同治療前。2.2療效觀察2.1.1補腎通絡中藥治療RA的療效50例RA患者中，痊愈28例，好轉(zhuǎn)15例，無效7例，有效率86.00%。2.2.2補腎
8、通絡中藥對外周血Foxp3基因表達水平的影響治療組治療前Foxp3基因表達水平為（2.11±1.05），治療后為（4.39±1.78），治療前后比較有顯著性差異（P＜0.01）；對照組Foxp3基因表達水平為（12.62±5.37），與治療組比較有
