淡水貝類多糖提取工藝的優(yōu)選

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1、淡水貝類多糖提取工藝的優(yōu)選作者：劉小燕，李朝品，湛孝東【關(guān)鍵詞】貝類多糖；,,提?。?,正交實(shí)驗(yàn)　　摘要：目的優(yōu)選淡水貝類多糖的最佳提取工藝。方法采用水提法，以多糖含量為指標(biāo)，利用正交實(shí)驗(yàn)法對提取過程中的醇沉濃度、浸提溫度、浸提比及浸提時(shí)間4個因素進(jìn)行優(yōu)選研究。結(jié)果最佳提取條件為：加無水乙醇至醇沉濃度為75%，浸提溫度60℃，浸提比1∶2，浸提時(shí)間6h。結(jié)論優(yōu)化的淡水貝類水提醇沉工藝簡便，合理，可行?！　￡P(guān)鍵詞：貝類多糖；提?。徽粚?shí)驗(yàn)　　Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractionprocessofshellfishpolysaccharide.

2、MethodsTakingthecontentofpolysaccharideasanindex,fourtechnologicalfactorsofperature,eusedandextractiontimeizedbyorthogonaltest.ResultsTheidealextractionprocesses;eachextractionrunning6hours.ConclusionTheoptimumextractingproceduresimple,reasonableandreliable.　　KeyMollusca），腹足綱（Gastropoda），前鰓亞綱（Pr

3、osobranchia），中腹足目（Mesogastropoda），田螺科（Viviparidae），圓田螺屬(CipangopaludinaHannibal)?！侗静菥V目》記載“田螺利濕清熱，止渴醒酒，利大小便；治腳氣、黃疸”。民間根據(jù)田螺有“清濕熱、利小便”等之作用，常應(yīng)用于治療小便不暢、黃疸、中耳炎、痔瘡等癥。近年，有關(guān)貝類多糖的研究證實(shí)其具有抗腫瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等多種生物學(xué)活性［2］，引起了學(xué)術(shù)界關(guān)注。貝類多糖的提取方法通常有水提法、堿提法和酶提法［3］，但是各種方法提取的最佳條件尚有待探討。本實(shí)驗(yàn)采用水提法提取，進(jìn)行了醇沉濃度、浸提溫度、浸提比及浸提時(shí)間四因

4、素三水平的正交實(shí)驗(yàn)，以找出一種最佳的提取方案，為進(jìn)一步研究貝類多糖活性奠定基礎(chǔ)?！　?器材　　1.1原料中國圓田螺，當(dāng)?shù)夭杉??！　?.2儀器和試劑無水乙醇（蚌埠化學(xué)試劑廠，AR），丙酮（江蘇省宜興市展望化工試劑廠，AR），高速組織搗碎機(jī)（上海標(biāo)本模型廠），高速離心機(jī)，恒溫磁力攪拌器(國華電器有限公司)，DZF6030A真空干燥箱（上海一恒科技有限公司），721分光光度計(jì)?！　?方法與結(jié)果　　2.1影響淡水貝類多糖提取主要因素的選擇根據(jù)　　表1淡水貝類多糖提取的因素水平（略）　　2.3淡水貝類粗多糖含量測定以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚－硫酸法測定淡水貝類粗多糖的多糖含量［4］。　　2.3.

5、1總糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取105℃下干燥至恒重的葡萄糖約60mg，置100ml量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1，1.5，2.0，2.5，3.0ml分別置于50ml容量瓶中，加蒸餾水定容。精密移取上述溶液各2ml，然后分別加入5%苯酚1ml，搖勻后迅速加入濃硫酸7ml，5min后置沸水浴中加熱30min，取出置冷水中冷卻。用分光光度計(jì)在波長490nm處測定吸光度A。以A值對濃度C繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=0.0545+0.0242C，r=0.9995?！　?.3.2精密度實(shí)驗(yàn)精密移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液

6、2ml，共5份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法操作測得平均吸光度為0.2845，相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為2.62%，結(jié)果表明精密度符合要求?！　?.3.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密移取樣品液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法操作，每10min測1次吸光度，到1h后改為30min測1次，120min內(nèi)測490nm處測定吸光度8次得出RSD為2.43%，結(jié)果表明測定值在120min內(nèi)保持穩(wěn)定。以下吸光度的測定均在120min內(nèi)完成?！　?.3.4供試液總糖含量測定精密量取淡水貝類粗多糖10mg置10ml容量瓶中加蒸餾水稀釋至刻度得供試液。取供試液各2ml，按“總糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線”項(xiàng)下操作，測定A值并代入回歸方程計(jì)算多糖含量。　　2

7、.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果結(jié)果見表2~3。　　表2正交實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)與結(jié)果（略）　　表3正交實(shí)驗(yàn)方差分析（略）　　由表2直觀分析影響淡水貝類多糖提取因素的主次順序?yàn)锳＞B＞C＞D；從表3的方差分析可見A因素各水平之間有極顯著性差異，B因素各水平之間有顯著性差異，C因素對多糖含量也有一定影響。綜合考慮最佳工藝為A2B2C1D1，即醇沉濃度75%，浸提溫度60℃，浸提比1∶2，浸提時(shí)間6h。　　2.5優(yōu)選工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按優(yōu)選的工藝進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，測得粗品