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1、二氫卡因酸鹽對海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的影響 【關(guān)鍵詞】二氫卡因酸鹽；海馬；大鼠 【Abstract】ObjectiveTheeffectofDHK,aselectiveinhibitorofglutamatetransportersubtypeGLT1,onthepyramidalneuronsintheCA1hippocampusicmodeladebyFourvesselocclusion.DHKinistratedbyinjectionintorightlateralcerebralventricle.Thebrainofthe
2、ratspus.ResultsThereidalneuronsintheCA1hippocampus,andtooffterdosedependent.ConclusionDHKcausedDNDofpyramidalneuronsintheCA1hippocampusinadosedependentmanner. 【Keypus；Rat腦缺血時細(xì)胞外液中谷氨酸等興奮性氨基酸濃度異常增高，這些興奮性氨基酸與突觸后膜的受體結(jié)合，引起鈣、鈉離子內(nèi)流增多而導(dǎo)致鈣超載，從而引起神經(jīng)細(xì)胞損傷，因此將這些氨基酸稱為興奮性神經(jīng)毒素［1］。降低腦缺血
3、時細(xì)胞外液中谷氨酸的濃度，減少其與突觸后膜特異性受體的結(jié)合，是防治其興奮性毒性作用、減輕缺血時神經(jīng)元損傷的重要手段。興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（EAATs）是調(diào)控腦內(nèi)細(xì)胞外液谷氨酸濃度的重要機(jī)制。到目前為止，發(fā)現(xiàn)并克隆了GLAST、GLT1、EAAC1、EAAT4和EAAT5五種高親和性EAATs［2］。GLAST、GLT1為膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)體，EAAC1、EAAT4和EAAT5為神經(jīng)元轉(zhuǎn)運(yùn)體［3］，其中GLT1在終止谷氨酸能神經(jīng)傳遞，維持細(xì)胞外液谷氨酸濃度處于低水平，防止其興奮性毒性作用方面發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察不同劑量GLT1抑制劑二氫
4、卡因酸鹽(DHK)對海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的影響。1材料與方法1.1動物模型采用四血管閉塞法制造大鼠全腦缺血模型［4］。健康雄性in注射完，留針2min。1.2實(shí)驗(yàn)分組將凝閉雙側(cè)椎動脈2d的動物隨機(jī)分為2組：①蒸餾水組（n=6）：右側(cè)腦室注射雙蒸水溶液20μl；②DHK組（n=30）：右側(cè)腦室注射DHK溶液20μl，根據(jù)DHK的劑量進(jìn)一步分為10、100、200、500和1000nmol5個亞組，每組6只。以上各組動物均在末次手術(shù)后7d斷頭取材，行組織學(xué)觀察。1.3觀察指標(biāo)及方法以上各組動物末次手術(shù)后7d斷頭取腦，冠狀切取視交叉后1～
5、4mm腦組織，常規(guī)腦組織切片，硫堇染色觀察海馬組織學(xué)改變。參照Kato［5］分級方法，將海馬CA1區(qū)組織學(xué)改變分為0、1、2、3級。高倍鏡下計(jì)數(shù)海馬CA1區(qū)每1mm區(qū)段內(nèi)錐體細(xì)胞數(shù)目，每張切片雙側(cè)海馬各計(jì)數(shù)3個區(qū)段，取平均數(shù)為神經(jīng)元密度（ND）。1.4數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3討論 谷氨酸是人和哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)含量最高的興奮性氨基酸，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的信號傳遞，但其過度釋放可產(chǎn)生嚴(yán)重的神經(jīng)興奮性毒性，從而引起神經(jīng)元的損傷或死亡［6］。星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中數(shù)量最多的一種細(xì)胞，與神經(jīng)元之間存在著復(fù)雜的細(xì)胞相互作
6、用，在生理情況下，膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體擔(dān)負(fù)著清除突觸間隙中谷氨酸、維持谷氨酸低濃度的重要作用，如果抑制了GLT1的功能，谷氨酸向膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)過程就會受到影響，引起突觸間隙谷氨酸濃度異常升高，將導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷。本實(shí)驗(yàn)中我們觀察了不同劑量（10、100、200、500和1000nmol）的GLT1抑制劑DHK對大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著DHK濃度的增大，神經(jīng)元的損傷程度逐漸嚴(yán)重，即DHK抑制了谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLT1的功能而引起海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元死亡，且呈劑量依賴性；當(dāng)DHK達(dá)到1000nmol時，海馬CA1區(qū)
7、錐體神經(jīng)元幾乎完全死亡。參考文獻(xiàn)1MatsumotoY,YamamotoS,SuzukiY,etal.Na+/H+exchangerinhibitor,SM20220，isprotectiveagainstexcitotoxicityinculturedcorticalneurons.Stroke,2004,35(1):185190.2O'SheaRD.Rolesandregulationofglutamatetransportersinthecentralnervoussystem.ClinExpPharmacolPhysiol,2
8、002,29(11):10181023.3SullivanR,RauenT,FischerF,etal.Cloning,transportproperties,anddifferentiallocalizationoft
