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1、RNA干擾技術(shù)在肝星狀細(xì)胞活化信號(hào)通路的應(yīng)用燕晟陽(yáng)學(xué)風(fēng)南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院消化內(nèi)科，湖南衡陽(yáng)421001[摘要]肝纖維化是各種致病因子致肝細(xì)胞損傷后的修復(fù)過(guò)度。肝星狀細(xì)胞(hepaticstellatecell，HSC)的激活被認(rèn)為是肝纖維化的核心環(huán)節(jié)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)多條信號(hào)傳導(dǎo)通路參與HSC的激活。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)能有效沉默目的基因，以HSC活化信號(hào)通路為切入點(diǎn)，設(shè)計(jì)小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)抑制相關(guān)信號(hào)通路的活化，從而達(dá)到抑制HSC，激活是目前研究肝纖維化機(jī)制的主要手段。該研究綜述
2、了RNAi技術(shù)在研究HSC活化信號(hào)途徑中的作用，以求為治療肝纖維化提供一種新思路。.jyqkultipleinjuries.Activatinghepaticstellatecellsisconsideredtobethecentraleventinliverfibrosis.Severalsignalingpatholeculartargetsofthesignalingpathail：[email protected]。肝纖維化是各種致病因子致肝細(xì)胞損傷后的修復(fù)過(guò)度，表現(xiàn)為肝結(jié)締組織異常增生，可進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌，降低生活質(zhì)量，出
3、現(xiàn)并發(fā)癥，嚴(yán)重危及生命。HSC是形成肝纖維化的主要細(xì)胞，它的激活被認(rèn)為是肝纖維化的核心環(huán)節(jié)。多種信號(hào)傳導(dǎo)通路與該激活過(guò)程的調(diào)控有關(guān)。RNA干擾技術(shù)（RNAinterference，RNAi）能特異性沉默目的基因，針對(duì)HSC活化信號(hào)途徑中的分子設(shè)計(jì)RNAi，能逆轉(zhuǎn)肝纖維化。該研究著重闡述了肝星狀細(xì)胞活化主要信號(hào)通路以及RNAi在這些信號(hào)通路的應(yīng)用。1RNA干擾技術(shù)RNAi是通過(guò)沉默目標(biāo)基因以研究基因和蛋白質(zhì)功能的研究手段，被廣泛的用于臨床疾病研究。作用的起始階段正義鏈和反義鏈混合的雙鏈(double-strandedRNA，dsRNA)在細(xì)胞內(nèi)與核酸內(nèi)切酶Ⅲ
4、結(jié)合后，其被切割成siRNA。效應(yīng)階段siRNA則降解成正義鏈和反義鏈，后者與內(nèi)切核酸酶以及其他蛋白一起形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RNA-inducedsilengcingplex，RISC)。RISC的核酸部分與外源性基因所表達(dá)mRNA靶向結(jié)合后，在結(jié)合部位切割mRNA，隨即RISC的蛋白部分引起mRNA降解。進(jìn)入擴(kuò)增階段，siRNA與mRNA結(jié)合，并將結(jié)合體作為引物，從而再次形成dsRNA。靶向mRNA全部降解致使目的基因沉默。2RNAi對(duì)致肝星狀細(xì)胞活化主要信號(hào)通路的應(yīng)用靜止?fàn)顟B(tài)的HSC，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(smoothmuscleacti
5、n-α，α-SMA)較少。當(dāng)肝臟受損時(shí)，HSC增殖活躍，細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)分泌增多，胞質(zhì)內(nèi)α-SMA產(chǎn)生增多[1]，此即HSC活化。實(shí)驗(yàn)證明轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforminggroads信號(hào)通路TGF-β是超家族TGF中的一員，其除了在ECM形成方面起著重要作用外還影響細(xì)胞的增殖、分化。不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)參與肝臟損傷修復(fù)的細(xì)胞如肝細(xì)胞，枯否細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞分泌大量TGFβ1，TGFβ1通過(guò)其受體（主要為TβRⅠ及TβRⅡ）作用于HSC，分泌大量ECM，其中TGFβ1被認(rèn)為是致肝纖維化最強(qiáng)的細(xì)胞因子。TGFβ1先與T
6、βRⅡ結(jié)合，再與活化的TβRⅡ激酶結(jié)合使TβRⅠ磷酸化，然后激活Smad2、3，Smad2、3與Smad4結(jié)合形成異源寡聚體，最后轉(zhuǎn)入胞核中發(fā)揮調(diào)控作用[2]。有人用Smad3siRNA轉(zhuǎn)染活化的HSC后膠原Ⅰ，Ⅲ，ⅠⅤmRNA表達(dá)受到了明顯抑制，說(shuō)明阻斷TGF-β/Smad3信號(hào)傳導(dǎo)途徑能對(duì)抗纖維化進(jìn)展。鄭素軍[3]等將Smad3-shRNA慢病毒感染HSC-T63后觀察細(xì)胞增殖，Smad3-shRNA組較對(duì)照組細(xì)胞增殖明顯下降(P=0．00)，表明Smad3-shRNA可阻斷TGFβ1對(duì)HSC－T6細(xì)胞的促增殖作用。而其他學(xué)者利用siRNA靶向沉默TG
7、F-β1后，HSC激活相關(guān)指標(biāo)均受到不同程度抑制，延緩肝纖維化進(jìn)程，并一定程度上逆轉(zhuǎn)肝纖維化。2.2的生成。CTGF在正常肝臟組織的CTGF表達(dá)很低，然而在肝纖維化患者體內(nèi)其表達(dá)顯著提高。整合素是跨膜蛋白家族成員之一，由α和β兩個(gè)亞基構(gòu)成，亞基上的胞外區(qū)與ECM相連，同時(shí)還是CTGF的細(xì)胞表面受體。Huang等[10]證實(shí)CTGF能與HSC表面整合素α5β1受體結(jié)合，在肝纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附的功能。粘著斑激酶(focaladhesionkinase，F(xiàn)AK)是體內(nèi)非受體型酪氨酸蛋白激酶之一，與相應(yīng)配體結(jié)合后經(jīng)不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)細(xì)
8、胞生長(zhǎng)、增殖、周期調(diào)控及凋亡等過(guò)程。FAK的N端與整合素亞基上的胞
