熊果酸對肝星狀細(xì)胞Hedgehog信號通路的影響

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1、學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的桫t：究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫)：降豁簽字日期：力肛年，二月彳日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允

2、許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名(手寫)：靜硌導(dǎo)師簽名(手寫)：簽字日期：力肛年，2月歹鄉(xiāng)日簽字日期：o口雎年，三月彩日摘要背景：各種原因?qū)е侣愿螕p傷可造成肝臟纖

3、維化，甚至發(fā)展成為肝硬化。靜止型肝星狀細(xì)胞(Quiescenthepaticstellatecells，Q．HSCs)的活化、增殖并轉(zhuǎn)化為肌纖維細(xì)胞樣肝星狀細(xì)胞(Muscleimofibroushepaticstellatecells，MF．HSCs)是肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展的中心事件。Hedgehog(Hh)信號通路在肝臟損傷修復(fù)過程中發(fā)揮著重要作用，特別是介導(dǎo)MF．HSCs的活化、增殖。有文獻表明，在HSCs活化、增殖過程中，Hh信號通路組成分子Hh配體[Sonichedgehog(sty)，Deserthedgeh

4、og(Dhh)，Indianhedgehog(Ihh)]、受體蛋白Patched(Ptch)、跨膜蛋白Smoothened(Smo)及鋅指轉(zhuǎn)錄因子(Glioblastomal／2，Glil／2)表達是上調(diào)的，而Hh配體相互作用蛋白(Hhinteractingprotein，Hhip)表達下調(diào)。新近研究發(fā)現(xiàn)NOX參與對Hh信號通路的調(diào)控，NOX亞基Racl能激活Hh信號通路，促進Q．HSC向MF．HSCs轉(zhuǎn)化。而我們前期研究發(fā)現(xiàn)熊果酸能顯著抑制瘦素誘導(dǎo)的NOX亞基p22Phox和RaclmRNA的表達。本研究將基于前期的

5、研究結(jié)果，進一步觀察熊果酸對瘦素誘導(dǎo)的Hh信號通路的影響。目的：探索熊果酸對大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC．T6)Hh信號通路的影響及機制。方法：將處于對數(shù)生長期的HSC．T6細(xì)胞分為6組：正常對照組；瘦素組(100ng／m1)；熊果酸(50／aM)；DPI組(20“M)；熊果酸干預(yù)組(瘦素+熊果酸50I，tM)；DPI干預(yù)組(瘦素+DPl20LtM)。在藥物作用12h后，提取總RNA，采用RT-PCR法檢測Shh、smo、Glil／2的表達；藥物作用HSC．T6細(xì)胞24小時后，提取總蛋白，采用Westernblotting分

6、別檢測Racl和Gli2的表達；藥物作用12h、24h及48h后，采用MTT法檢測HSC．T6細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果：1．熊果酸對HSC．T6細(xì)胞ShhmRNA表達的影響瘦素刺激HSC—T6細(xì)胞12h后ShhmRNA表達較正常對照組升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意見(P>0．05)；熊果酸干預(yù)后ShhmRNA表達明顯低于瘦素組及正常對照組(均P<0．05)；DPI干預(yù)組ShhmRNA表達明顯低于瘦素組及正常對照組摘要(均P<0．0t)。上述結(jié)果表明熊果酸、DPI均能下調(diào)瘦素介導(dǎo)的HSC．T6細(xì)胞ShhmRNA的表達，而且DPI的抑

7、制作用強于熊果酸。2．熊果酸對HSC—T6細(xì)胞SmomRNA表達的影響瘦素刺激HSC．T6細(xì)胞12h后SmomRNA表達較正常對照組升高(P<0．05)；熊果酸干預(yù)后SmomRNA表達明顯低于瘦素組及正常對照組(P

8、SC．T6細(xì)胞GlilmRNA的表達無影響，而熊果酸及DPI干預(yù)也不影響HSC．T6細(xì)胞GlilmRNA的表達。4．熊果酸對HSC．T6細(xì)胞Gli2mRNA表達的影響瘦素刺激HSC．T6細(xì)胞12h后Gli2mRNA表達較『F常對照組升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意見(P>O．05)；熊果酸、DPI干預(yù)后Gli2mRNA表達均明顯低于瘦素組(