熊果酸對(duì)肝星狀細(xì)胞Hedgehog信號(hào)通路的影響

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1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的桫t：究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫(xiě))：降豁簽字日期：力肛年，二月彳日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允

2、許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤(pán)版)電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》和《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》中全文發(fā)表，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名(手寫(xiě))：靜硌導(dǎo)師簽名(手寫(xiě))：簽字日期：力肛年，2月歹鄉(xiāng)日簽字日期：o口雎年，三月彩日摘要背景：各種原因?qū)е侣愿螕p傷可造成肝臟纖

3、維化，甚至發(fā)展成為肝硬化。靜止型肝星狀細(xì)胞(Quiescenthepaticstellatecells，Q．HSCs)的活化、增殖并轉(zhuǎn)化為肌纖維細(xì)胞樣肝星狀細(xì)胞(Muscleimofibroushepaticstellatecells，MF．HSCs)是肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展的中心事件。Hedgehog(Hh)信號(hào)通路在肝臟損傷修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，特別是介導(dǎo)MF．HSCs的活化、增殖。有文獻(xiàn)表明，在HSCs活化、增殖過(guò)程中，Hh信號(hào)通路組成分子Hh配體[Sonichedgehog(sty)，Deserthedgeh

4、og(Dhh)，Indianhedgehog(Ihh)]、受體蛋白Patched(Ptch)、跨膜蛋白Smoothened(Smo)及鋅指轉(zhuǎn)錄因子(Glioblastomal／2，Glil／2)表達(dá)是上調(diào)的，而Hh配體相互作用蛋白(Hhinteractingprotein，Hhip)表達(dá)下調(diào)。新近研究發(fā)現(xiàn)NOX參與對(duì)Hh信號(hào)通路的調(diào)控，NOX亞基Racl能激活Hh信號(hào)通路，促進(jìn)Q．HSC向MF．HSCs轉(zhuǎn)化。而我們前期研究發(fā)現(xiàn)熊果酸能顯著抑制瘦素誘導(dǎo)的NOX亞基p22Phox和RaclmRNA的表達(dá)。本研究將基于前期的

5、研究結(jié)果，進(jìn)一步觀察熊果酸對(duì)瘦素誘導(dǎo)的Hh信號(hào)通路的影響。目的：探索熊果酸對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC．T6)Hh信號(hào)通路的影響及機(jī)制。方法：將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HSC．T6細(xì)胞分為6組：正常對(duì)照組；瘦素組(100ng／m1)；熊果酸(50／aM)；DPI組(20“M)；熊果酸干預(yù)組(瘦素+熊果酸50I，tM)；DPI干預(yù)組(瘦素+DPl20LtM)。在藥物作用12h后，提取總RNA，采用RT-PCR法檢測(cè)Shh、smo、Glil／2的表達(dá)；藥物作用HSC．T6細(xì)胞24小時(shí)后，提取總蛋白，采用Westernblotting分

6、別檢測(cè)Racl和Gli2的表達(dá)；藥物作用12h、24h及48h后，采用MTT法檢測(cè)HSC．T6細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果：1．熊果酸對(duì)HSC．T6細(xì)胞ShhmRNA表達(dá)的影響瘦素刺激HSC—T6細(xì)胞12h后ShhmRNA表達(dá)較正常對(duì)照組升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意見(jiàn)(P>0．05)；熊果酸干預(yù)后ShhmRNA表達(dá)明顯低于瘦素組及正常對(duì)照組(均P<0．05)；DPI干預(yù)組ShhmRNA表達(dá)明顯低于瘦素組及正常對(duì)照組摘要(均P<0．0t)。上述結(jié)果表明熊果酸、DPI均能下調(diào)瘦素介導(dǎo)的HSC．T6細(xì)胞ShhmRNA的表達(dá)，而且DPI的抑

7、制作用強(qiáng)于熊果酸。2．熊果酸對(duì)HSC—T6細(xì)胞SmomRNA表達(dá)的影響瘦素刺激HSC．T6細(xì)胞12h后SmomRNA表達(dá)較正常對(duì)照組升高(P<0．05)；熊果酸干預(yù)后SmomRNA表達(dá)明顯低于瘦素組及正常對(duì)照組(P

8、SC．T6細(xì)胞GlilmRNA的表達(dá)無(wú)影響，而熊果酸及DPI干預(yù)也不影響HSC．T6細(xì)胞GlilmRNA的表達(dá)。4．熊果酸對(duì)HSC．T6細(xì)胞Gli2mRNA表達(dá)的影響瘦素刺激HSC．T6細(xì)胞12h后Gli2mRNA表達(dá)較『F常對(duì)照組升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意見(jiàn)(P>O．05)；熊果酸、DPI干預(yù)后Gli2mRNA表達(dá)均明顯低于瘦素組(