磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法檢測(cè)hbsag比較與應(yīng)用

《磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法檢測(cè)hbsag比較與應(yīng)用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法檢測(cè)HBsAg比較與應(yīng)用唐勁松(東莞市大朗醫(yī)院檢驗(yàn)科523770)【摘要】目的比較磁珠濃縮法與酶聯(lián)免疫法(EUSA)檢測(cè)HBsAg靈敏度和陽(yáng)性檢出率，選用較好的方法用于低濃HBsAg的測(cè)定。方法EUSA檢測(cè)HBsAg為強(qiáng)陽(yáng)性的血清標(biāo)木40份，混合為HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性混合血清，用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBsAg全陰性血清稀釋成46例濃度不同的HBsAg陽(yáng)性血清，然后分別用磁珠濃縮法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。結(jié)果磁珠濃縮法檢測(cè)46份標(biāo)木陽(yáng)性例數(shù)42例，最低檢出濃度0.1IU/mL,EUSA檢岀陽(yáng)性標(biāo)木33例，最低檢出濃度0.5IU/mL,磁珠濃縮法靈敏度和檢出率明顯高于EUSA(

2、P<0.01)。結(jié)論磁珠濃縮法可明顯提高EUSA檢測(cè)HBsAg的靈敏度和陽(yáng)性檢出率，只有一定的研究意義?！娟P(guān)鍵詞】HBsAg靈敏度磁珠濃縮法【中圖分類(lèi)號(hào)】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2013)34-0208-02乙型肝炎病毒(HBV)感染簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝，是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病，在我國(guó)感染率相當(dāng)高。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝診斷及治療評(píng)估中非常重要的血清學(xué)標(biāo)志物。研究表明，低濃度HBsAg人群在我國(guó)占有不小比例(占HBsAg陽(yáng)性人群22.01%)[1]。如果漏檢，可能導(dǎo)致HBV通過(guò)手術(shù)、輸血、母嬰垂直等途徑傳播。有效檢測(cè)低濃度HBsAg,具有重要的臨

3、床和流行病學(xué)意義。木文釆用磁珠濃縮法和酶聯(lián)免疫法(EUSA)檢測(cè)不同濃度HBsAg陽(yáng)性標(biāo)木，比較兩種方法靈敏度和陽(yáng)性檢出率，旨在為低濃度HBsAg血清提供敏感、實(shí)用的檢測(cè)方法。1材料與方法1.1材料1.1.1標(biāo)木來(lái)源收集2012年期間在木醫(yī)院接受抗病毒治療的乙型肝炎患者，經(jīng)EUSA檢測(cè)HBsAg為強(qiáng)陽(yáng)性的血清標(biāo)木40份，混合為HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性混合血清,用經(jīng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎標(biāo)志物全陰性血清稀釋成46例濃度不同的HBsAg陽(yáng)性血清。1.1.2儀器和試劑羧基磁珠和磁分離架由上海奧潤(rùn)微納新材料科技冇限公司和無(wú)錫中德捫爾生物技術(shù)有限公司提供，HBsAgEUSA試劑盒由廈門(mén)英科（新創(chuàng)）生物右限公司

4、提供。酶標(biāo)儀為法國(guó)Mutiskan-MK3,美國(guó)W克曼DXI-600全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和配套試劑。1.2方法分別用磁珠濃縮法［2］、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)46例濃度不同的HBsAg陽(yáng)性血清，酶標(biāo)儀測(cè)定HBsAg的吸光度值，并計(jì)算S/CO值（吸光度值與臨界值的比值）。當(dāng)S/CO值≥l吋，結(jié)果為陽(yáng)性；S/CO值<l時(shí)，結(jié)果為陰性［3】。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSSI3.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果磁珠濃縮法檢測(cè)46份標(biāo)本陽(yáng)性例數(shù)42例，最低檢出濃度O.：UU/mL,ELISA檢出陽(yáng)性標(biāo)本33例，最低檢出濃度0.5IU/mL靈敏度和檢

5、出率明顯高于與ELISA（P<0.01）,見(jiàn)表1。表1三種方法測(cè)定HBsAg結(jié)果比較3討論我國(guó)是一個(gè)乙肝高發(fā)國(guó)家，HBV感染的診斷工作對(duì)乙肝的防治工作奮重大意義。目前一般認(rèn)為HBsAg陽(yáng)性是HBV感染的標(biāo)志，乙肝兩對(duì)半作為HBV感染最常用的檢測(cè)，在我國(guó)各級(jí)醫(yī)院廣泛開(kāi)展。0前我國(guó)檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的方法主要奮金標(biāo)法、酶免法、化學(xué)發(fā)光法和電化學(xué)發(fā)光法，艽中酶免法應(yīng)用最廣泛。在高濃度HBsAg標(biāo)本中，上述檢測(cè)方法區(qū)別不大，但是在低濃度HBsAg標(biāo)本中，各種方法檢測(cè)結(jié)果可能不同。在乙型肝炎病毒感染的“窗U期”、急性期后或恢復(fù)期、自限性感染末期的攜帶者等情況下人體內(nèi)會(huì)出現(xiàn)低濃度的HBsAg。低濃度H

6、BsAg的患者體內(nèi)可能存在著肝臟的持續(xù)性損傷和病毒復(fù)制，一旦發(fā)生漏檢就會(huì)嚴(yán)重影響臨床診治和輸血安全，應(yīng)該引起高度重視[4]。采用微粒子酶免疫技術(shù)(MEIA)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),低濃度HBsAg的檢出率得到顯著提高。MEIA法雖然具有重復(fù)性好，安全封閉，操作不易被污染的優(yōu)點(diǎn)，但由于需要大型儀器，成本較高，基層醫(yī)院很難普及，檢測(cè)費(fèi)用也比較高，不為大多數(shù)患者承受，有一定的局限性。EUSA法操作簡(jiǎn)便快速，試劑成本低，適用于大批量人群的篩査試驗(yàn)，對(duì)高濃度HBsAg檢測(cè)可與某些先進(jìn)技術(shù)相媲美,但是靈敏度比較低,對(duì)低濃度HBsA易漏診。如何比較奮效和經(jīng)濟(jì)的提高ELISA檢測(cè)HBsAg

7、的靈敏度是研宄的重點(diǎn)。磁珠(MagneticBeads)是一種由磁性材料和非磁性聚合物材料復(fù)合而成的新型功能微球。磁珠己廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的分離提純、細(xì)胞分離、酶的固定以及免疫分析等多個(gè)領(lǐng)域。磁珠提取蛋白質(zhì)與磁珠表面基團(tuán)有關(guān)，在特定的鹽離子和pH環(huán)境下，可以與蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)合與解離[5]。Satoh等[3】使用磁珠濃縮處理標(biāo)本后，其HBsAg濃縮水平提高了4?7倍。本文采用市場(chǎng)上廣泛生產(chǎn)的羧基磁珠吸附血源性HBs