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《酶聯(lián)免疫法與膠體金法結合判斷hbsag準確性的探討》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在應用文檔-天天文庫。
1、酶聯(lián)免疫法與膠體金法結合判斷HBsAg準確性的探討【關鍵詞】酶免疫測定膠體金肝炎表面抗原乙型現(xiàn)在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的檢測已經非常普遍，但由于受檢測方法的限制和乙肝感染的病程及標本的采集、操作等因素的影響，經常出現(xiàn)HBsAg檢測的假陽性和假陰性現(xiàn)象［1］。目前HBsAg的檢測方法臨床實驗室中多采用膠體金法（GIA）和酶聯(lián)免疫法（EiA）。為提高檢測的準確性，筆者對HBsAg的檢測方案作了探討，通過近一年的實踐總結，酶聯(lián)免疫試劑與膠體金試劑相結合對檢測HBsAg的準確性大有提高，幾乎避免了
2、假陽性和假陰性的發(fā)生，現(xiàn)報告如下： 1材料與方法 1.1標本來源于2006年1～12月我院住院和門診病人送檢的HBsAg和乙肝兩對半血液標本，不抗凝，保證正確處理血液標本得到待檢血清，共計5819份?！ ?.2試劑 ①酶聯(lián)免疫試劑盒：科華、新創(chuàng)生產（選用年報批量前3名的試劑）；②膠體金試劑：新創(chuàng)生產（通過對比幾個廠家，選用靈敏度最好的）；③HBsAg確認試劑：雅培（Murex）公司生產；所有試劑均按說明書進行操作?！ ?.3儀器 酶標儀：芬蘭MK-3雷勃酶標儀；洗板機：科華ST-36W洗板
3、機 1.4方法 所有初檢標本先選用一個廠家的酶聯(lián)免疫試劑檢測，以酶標儀讀數(shù)為準，按S/C.O.分類：①S/C.O.＞1的標本即EIA法陽性者，再用膠體金試劑測試，若亦為陽性者即報告陽性；若為陰性者，則再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復檢，兩種試劑均重復為陽性者則報告陽性；反之，建議做中和確認試驗或PCR檢測HBV-DNA來報結果。②對于S/C.O.介于0.5～1的標本，再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復檢，兩種試劑均重復為陽性者則報告陽性；反之，建議做中和確認試驗或PCR檢測HBV-DNA來報結果。③對于
4、S/C.O.＜0.5的標本直接報告為陰性。 1.5其他 如果受檢者須在極短的時間內得到檢測結果或標本出現(xiàn)嚴重溶血、脂血等狀態(tài)而無法重新采集時，則直接選用膠體金試劑進行檢測。在檢測結果中必須注明檢測方法為GIA，必要時通知重新采樣再用酶聯(lián)免疫試劑復檢。 2結果 2.1酶聯(lián)免疫試劑初檢5819份標本，其中S/C.O.＞1為陽性者426份；S/C.O.介于0.5～1者28份；S/C.O.＜0.5為陰性者5365份。 2.2對S/C.O.＞1為陽性者426份再次用膠體金試劑全部重復檢測，重復陽性
5、者有411份直接報告陽性，還有15份為陰性者?！ ?.3對以上S/C.O.介于0.5～1者28份和酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者15份共計43份，再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復檢?！ ?.4再同時用HBsAg中和確認試劑復檢。結果見表1。表1EiA與GIA檢測結果（略） 3討論盡管EIA的靈敏度和特異性比較高，但影響酶聯(lián)免疫試劑檢測結果的因素較多，如：血液樣本的處理、加樣操作、溫育洗板、比色判讀、質控的好壞、試劑盒的質量直接決定了結果的準確性，也就是說檢測過程中偶然誤差出現(xiàn)機率較大，在此不做討
6、論；通過采用敏感性和特異性均低于EIA的GIA復檢，其偶然誤差大大低于EIA，相互結合、優(yōu)勢互補，經濟、快速、準確［2］。有資料證明［3］，在我國的乙型肝炎病毒感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低水平狀態(tài)存在，HBsAg蛋白的決定簇結構突變，造成不同的HBsAg試劑對突變株的檢測能力不同，這些不同可能造成不一致的檢測結果；血液中某些因子或藥物的干擾，造成標本出現(xiàn)用酶聯(lián)免疫試劑檢測S/C.O.值介于0.5～1之間，及酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者。對于用酶聯(lián)免疫試劑檢測S/C.O.值介于0.5
7、～1之間的標本，及酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者，通過兩種酶聯(lián)免疫試劑盒的雙孔復檢核對，HBsAg檢測的準確性大大提高［4］。對于一些疑難特殊的標本可作HBsAg中和確認試劑得到可靠結果。在本觀察中，S/C.O.介于0.5～1者28份，雙孔復檢和中和確認均檢出2份陽性；酶聯(lián)免疫試劑陽性而膠體金試劑陰性者15份，雙孔復檢出11份陽性，中和確認結果10份陽性，二者檢測結果基本相符。兩者聯(lián)合，使檢測結果的準確度大為提高，值得在臨床推廣?！緟⒖?/p>
