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1、酶聯(lián)免疫法與膠體金法結(jié)合判斷HBsAg準(zhǔn)確性的探討【關(guān)鍵詞】酶免疫測(cè)定膠體金肝炎表面抗原乙型現(xiàn)在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的檢測(cè)已經(jīng)非常普遍，但由于受檢測(cè)方法的限制和乙肝感染的病程及標(biāo)本的采集、操作等因素的影響，經(jīng)常出現(xiàn)HBsAg檢測(cè)的假陽(yáng)性和假陰性現(xiàn)象［1］。目前HBsAg的檢測(cè)方法臨床實(shí)驗(yàn)室中多采用膠體金法（GIA）和酶聯(lián)免疫法（EiA）。為提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，筆者對(duì)HBsAg的檢測(cè)方案作了探討，通過(guò)近一年的實(shí)踐總結(jié)，酶聯(lián)免疫試劑與膠體金試劑相結(jié)合對(duì)檢測(cè)HBsAg的準(zhǔn)確性大有提高，幾乎避免了
2、假陽(yáng)性和假陰性的發(fā)生，現(xiàn)報(bào)告如下： 1材料與方法 1.1標(biāo)本來(lái)源于2006年1～12月我院住院和門(mén)診病人送檢的HBsAg和乙肝兩對(duì)半血液標(biāo)本，不抗凝，保證正確處理血液標(biāo)本得到待檢血清，共計(jì)5819份。 1.2試劑 ?、倜嘎?lián)免疫試劑盒：科華、新創(chuàng)生產(chǎn)（選用年報(bào)批量前3名的試劑）；②膠體金試劑：新創(chuàng)生產(chǎn)（通過(guò)對(duì)比幾個(gè)廠家，選用靈敏度最好的）；③HBsAg確認(rèn)試劑：雅培（Murex）公司生產(chǎn)；所有試劑均按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作?！ ?.3儀器 酶標(biāo)儀：芬蘭MK-3雷勃酶標(biāo)儀；洗板機(jī)：科華ST-36W洗板
3、機(jī) 1.4方法 所有初檢標(biāo)本先選用一個(gè)廠家的酶聯(lián)免疫試劑檢測(cè)，以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，按S/C.O.分類：①S/C.O.＞1的標(biāo)本即EIA法陽(yáng)性者，再用膠體金試劑測(cè)試，若亦為陽(yáng)性者即報(bào)告陽(yáng)性；若為陰性者，則再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復(fù)檢，兩種試劑均重復(fù)為陽(yáng)性者則報(bào)告陽(yáng)性；反之，建議做中和確認(rèn)試驗(yàn)或PCR檢測(cè)HBV-DNA來(lái)報(bào)結(jié)果。②對(duì)于S/C.O.介于0.5～1的標(biāo)本，再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復(fù)檢，兩種試劑均重復(fù)為陽(yáng)性者則報(bào)告陽(yáng)性；反之，建議做中和確認(rèn)試驗(yàn)或PCR檢測(cè)HBV-DNA來(lái)報(bào)結(jié)果。③對(duì)于
4、S/C.O.＜0.5的標(biāo)本直接報(bào)告為陰性?！ ?.5其他 如果受檢者須在極短的時(shí)間內(nèi)得到檢測(cè)結(jié)果或標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血、脂血等狀態(tài)而無(wú)法重新采集時(shí)，則直接選用膠體金試劑進(jìn)行檢測(cè)。在檢測(cè)結(jié)果中必須注明檢測(cè)方法為GIA，必要時(shí)通知重新采樣再用酶聯(lián)免疫試劑復(fù)檢?！ ?結(jié)果 2.1酶聯(lián)免疫試劑初檢5819份標(biāo)本，其中S/C.O.＞1為陽(yáng)性者426份；S/C.O.介于0.5～1者28份；S/C.O.＜0.5為陰性者5365份?！ ?.2對(duì)S/C.O.＞1為陽(yáng)性者426份再次用膠體金試劑全部重復(fù)檢測(cè)，重復(fù)陽(yáng)性
5、者有411份直接報(bào)告陽(yáng)性，還有15份為陰性者。 2.3對(duì)以上S/C.O.介于0.5～1者28份和酶聯(lián)免疫試劑陽(yáng)性而膠體金試劑陰性者15份共計(jì)43份，再用兩種酶聯(lián)免疫試劑做雙孔復(fù)檢。 2.4再同時(shí)用HBsAg中和確認(rèn)試劑復(fù)檢。結(jié)果見(jiàn)表1。表1EiA與GIA檢測(cè)結(jié)果（略） 3討論盡管EIA的靈敏度和特異性比較高，但影響酶聯(lián)免疫試劑檢測(cè)結(jié)果的因素較多，如：血液樣本的處理、加樣操作、溫育洗板、比色判讀、質(zhì)控的好壞、試劑盒的質(zhì)量直接決定了結(jié)果的準(zhǔn)確性，也就是說(shuō)檢測(cè)過(guò)程中偶然誤差出現(xiàn)機(jī)率較大，在此不做討
6、論；通過(guò)采用敏感性和特異性均低于EIA的GIA復(fù)檢，其偶然誤差大大低于EIA，相互結(jié)合、優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確［2］。有資料證明［3］，在我國(guó)的乙型肝炎病毒感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低水平狀態(tài)存在，HBsAg蛋白的決定簇結(jié)構(gòu)突變，造成不同的HBsAg試劑對(duì)突變株的檢測(cè)能力不同，這些不同可能造成不一致的檢測(cè)結(jié)果；血液中某些因子或藥物的干擾，造成標(biāo)本出現(xiàn)用酶聯(lián)免疫試劑檢測(cè)S/C.O.值介于0.5～1之間，及酶聯(lián)免疫試劑陽(yáng)性而膠體金試劑陰性者。對(duì)于用酶聯(lián)免疫試劑檢測(cè)S/C.O.值介于0.5
7、～1之間的標(biāo)本，及酶聯(lián)免疫試劑陽(yáng)性而膠體金試劑陰性者，通過(guò)兩種酶聯(lián)免疫試劑盒的雙孔復(fù)檢核對(duì)，HBsAg檢測(cè)的準(zhǔn)確性大大提高［4］。對(duì)于一些疑難特殊的標(biāo)本可作HBsAg中和確認(rèn)試劑得到可靠結(jié)果。在本觀察中，S/C.O.介于0.5～1者28份，雙孔復(fù)檢和中和確認(rèn)均檢出2份陽(yáng)性；酶聯(lián)免疫試劑陽(yáng)性而膠體金試劑陰性者15份，雙孔復(fù)檢出11份陽(yáng)性，中和確認(rèn)結(jié)果10份陽(yáng)性，二者檢測(cè)結(jié)果基本相符。兩者聯(lián)合，使檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度大為提高，值得在臨床推廣?！緟⒖?/p>
