鱉甲炮制前后對肝星狀細胞增殖影響的比較研究論文

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1、鱉甲炮制前后對肝星狀細胞增殖影響的比較研究論文施婧妮,胡春玲,唐尹萍,趙剛,劉焱文【摘要】目的比較鱉甲生品和醋制品對大鼠肝星狀細胞(HSCT6)增殖的影響，為鱉甲醋制品抗肝纖維化的臨床應用提供依據(jù)。方法傳代培養(yǎng)的HSCT6與鱉甲生品和醋制品超聲提取物，鱉甲生品和醋制品回流提取物共同培養(yǎng)72h后，采用MTT比色法測定各濃度組HSCT6的增殖情況。結果兩種提取方式相互驗證了鱉甲生品和醋制品對HSCT6細胞增殖均有抑制作用，且鱉甲醋制品的作用優(yōu)于鱉甲生品。結論鱉甲醋制品的抗肝纖維化作用優(yōu)于鱉甲生

2、品?！娟P鍵詞】鱉甲;炮制前后;肝星狀細胞;MTT法AbstractObjectiveToparetheimfluenceofthecrudeandprocessedTrionyxsinensiscarapaceonrathepaticstellatecellproliferation(HSCT6),thustoguidetheclinicalapplicationofTrionyxsinensiscarapaceonthethetreatmentofliverfibrosis.MethodsSe

3、condarycultureHSCT6invitro,rapactsofTrionyxsinensiscarapaceextractsatdifferentconcentrationsonHSCT6.ResultsThecrudeandprocessedTrionyxsinensiscarapacecanbothinhibitproliferationofHSCT6,andtheantiproliferationeffectsonHSCT6uturallyauthenticatedbyu

4、ltrasonicextractionandrefluxextraction.ConclusionTheprocessedTrionyxsinensiscarapacehasbetterfunctioninantiliverfibrosisthanthecrude.Keyann)的背甲1，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，收載于歷年版《中華人民共和國藥典》，具有滋陰潛陽.freelpus公司產(chǎn)品;潔凈工作臺，上海博迅醫(yī)療設備廠產(chǎn)品。1.2方法1.2.1鱉甲提取物的制備1.2.1.1鱉甲超聲提取物的制備(1)

5、稱取醋鱉甲粉(80目)25g，加蒸餾水100ml，超聲50min，抽濾，藥渣再加50ml蒸餾水，超聲50min，抽濾，合并兩次濾液，冷凍干燥后得凍干粉，為樣品Ⅰ。(2)生鱉甲按上述方法制備得到樣品Ⅱ。1.2.1.2鱉甲回流提取物的制備(1)稱取醋鱉甲粉(80目)25g，加蒸餾水100ml，100℃回流提取2h，抽濾，藥渣再加50ml蒸餾水，100℃回流提取2h，抽濾，合并兩次濾液，冷凍干燥后得凍干粉，為樣品Ⅲ。(2)生鱉甲按上述方法制備得到樣品Ⅳ。1.2.2HSCT6的培養(yǎng)及傳代將傳代的HSC

6、T6培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素和1%NEAA的HighDMEM培養(yǎng)液中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);待細胞在培養(yǎng)瓶中生長至鋪滿瓶底60%以上面積時，即可用0.25%胰蛋白酶消化30秒至1分鐘左右，當細胞開始收縮、間隙增大時立即棄去消化液，靜置約30秒至1分鐘左右，加入含10%胎牛血清的HighDMEM培養(yǎng)液，輕輕吹打貼壁細胞使之成為均勻的細胞懸液，取10μl細胞懸液光鏡下計數(shù)，用培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度，以1×105/ml傳代。1.2

7、.3實驗分組及藥物處理待細胞長滿培養(yǎng)板底后，換用5%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h后分別加入高、中、低劑量鱉甲藥液(以含5%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基倍比稀釋成56.0000mg/ml、28.0000mg/ml、14.0000mg/ml，用0.45μm濾膜過濾)，4孔重復，另設空白對照組(含5%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基)。1.2.4MTT比色法測定HSCT6增殖傳代HSCT6細胞按1×105的密度接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加100μl，細胞貼壁長滿孔底12h后，換含5%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)

8、基，培養(yǎng)12h后，加入高、中、低劑量鱉甲藥液。每一濃度設4復孔，另設空白對照組，去培養(yǎng)基(翻板)，每孔加20μlMTT溶液;孵育4h，每孔加入DMSO100μl，在微型混合器上振蕩2min，10min后于酶標儀上測定OD490值。抑制率=(1-藥物組OD值/對照組OD值)×100%1.3統(tǒng)計學處理實驗結果以(x±s)表示。應用單因素方差分析，P0.05為差異有顯著性。2結果2.1鱉甲生品和醋制品超聲提取物對HSCT6細胞增殖的影響傳代培養(yǎng)的HSCT6與不同濃度樣品Ⅰ、樣品Ⅱ共同