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《lmo3 mrna在小鼠腦發(fā)育過程中的表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、LMO3mRNA在小鼠腦發(fā)育過程中的表達作者：惠玲，蔡文琴，紀華，呂同德，楊金升，趙治華【關(guān)鍵詞】LMO3；原位雜交組織化學；小鼠；腦 【Abstract】AIM:ToexaminethelocalizationofneuronalspecifictranscriptionfactorLMO3mRNAinthedevelopmentofcentralnervoussystem(S)ofthemice.METHODS:RealtimefluorescencequantitativeRTPCR(FQRTPCR)andinsituhybridizationhistochem
2、icalstainingmethodRNA.RESULTS:TheFQRTPCRshoRNAostremainedthesameleveluntiladult.LMO3mRNAexpressionbryonicstages(E10.511.5d),butnotdetectedatotherpartsofembryo.Thehighlevelinbrainid(E15.5d)andlate(E17.5P0d)embryonicbrainandshoent,LMO3mRNARNAexpressionofP14P60doreregionalthanthatofP7d.Thes
3、ignalofLMO3mRNAainlylocatedindifferentnucleusclonyandshoentduringembryonicperiodandpostnataldifferentiationandspecificationofspecificbrainregions. 【Keyistry;mice;brain 【摘要】目的：研究不同發(fā)育時期小鼠腦內(nèi)LMO3的表達.方法：采用以SYBRGreenI為熒光染料的定量RTPCR及以地高辛標記的cRNA為探針的原位雜交組織化學法檢測LMO3基因在小鼠腦發(fā)育過程中的表達.結(jié)果：FQRTPCR結(jié)果表明，L
4、MO3在出生前高表達，P7d后表達水平急劇下降，至成年都維持在一個較低的水平.LMO3mRNA在小鼠胚胎期E10.5d即有表達，但僅限于整個腦泡組織內(nèi)，胚體其他區(qū)域均為陰性；E11.5d腦區(qū)信號逐漸加強，無核團及腦區(qū)的特異性，胚體其他部分仍為陰性；E15.5～P0d期LMO3陽性信號在幾乎所有觀察的腦區(qū)均有廣泛而較強的著色；P7dLMO3陽性信號較出生前變?nèi)?，分布逐漸集中；P14～P60dLMO3mRNA表達范圍較P7d逐漸縮小，但仍有廣泛表達，陽性信號主要集中于不同核團，表達有強弱之分.結(jié)論：LMO3基因可能與小鼠出生前腦的發(fā)育以及出生后特定腦區(qū)神經(jīng)元的特化及特性維持
5、有關(guān). 【關(guān)鍵詞】LMO3；原位雜交組織化學；小鼠；腦 0引言 多巴胺相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子DAT1(GenBank登錄號：AF258348)又稱LMO3，是我們獲得的星形膠質(zhì)細胞在DA作用下發(fā)生反應(yīng)性變化時上調(diào)表達的基因之一［1］.LMO家族由4個成員組成，即LMO1～LMO4.我們以往的研究證實LMO3mRNA在成年大鼠和小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)（S）中分布廣泛，提示LMO3基因在S有重要作用［2］.本試驗采用實時熒光定量RTPCR方法及原位雜交組織化學的方法對LMO3mRNA在小鼠腦發(fā)育過程中的表達變化進行了研究，以探討LMO3在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的作用. 1材料和方法 1
6、.1材料成年昆明種雌雄小鼠由本院實驗動物中心提供.于每日18：00按雌雄1∶1合籠，次日晨取出，檢查雌鼠的陰道口有無陰栓，有陰栓者既定為孕期0d(E0d)，出生當日為生后1d(P0)，依此類推.分別取E10.5，E11.5,E15.5，E17.5，P0，P7，P14，P30，P60d的小鼠，每組5只，進行原位雜交檢測并提取總RNA后用于熒光定量RTPCR試驗.地高辛標記小鼠LMO3cRNA寡聚核苷酸探針由湖北武漢博士德公司合成. 1.2方法 1.2.1熒光定量RTPCR采用Tri201試劑提取制備總RNA，測定A260nm對RNA進行準確定量.取2μg總RNA，經(jīng)M
7、MLV逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成cDNA第一鏈，以此為模板進行熒光定量PCR擴增，熒光介質(zhì)選用SYBRGreenI，根據(jù)同時擴增的標準曲線，計算出各樣本的初始拷貝數(shù)，結(jié)果以LMO3copies/G3PDHcopies表示LMO3mRNA在各組起始RNA中的相對含量.在PCR后進行融解曲線分析以確定得到的產(chǎn)物是否為目的產(chǎn)物，溫度以0.2℃/s的速率從55℃緩慢遞增到100℃.同時將反應(yīng)產(chǎn)物置20g/L瓊脂糖凝膠電泳進一步觀察擴增產(chǎn)物的特異性. 1.2.2原位雜交組織化學全胚胎原位雜交新鮮取材的鼠胚(E10.511.5)用PBS洗2次，入4%多聚甲醛
