白英中總皂苷的含量測定論文

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1、白英中總皂苷的含量測定論文甄會賢,齊燁,陳揚,孫立新【摘要】目的建立白英中總皂苷的含量測定方法。方法選用薯蕷皂苷元為對照品,采用分光光度法,高氯酸顯色,在410nm處測定吸光度,計算白英中總皂苷含量。結(jié)果薯蕷皂苷元的質(zhì)量濃度在8.91~29.70μg/ml范圍內(nèi)與吸光度值呈良好線性關(guān)系(r=0.9992).freelethodoftotalsaponinsinSolanumlyratumThunb..MethodsSelectingdiosgeninascontrolarticle,coloratinginingabsorbabilityinthepointo

2、f410nmbyadoptingspectrophotometricmethod,thencalculatingtotalsaponinsinSolanumlyratumThunb..ResultsThecalibrationcurvelplesfromdifferentareascontainedvariousamounts.ConclusionThemethodissimple,.freellyratumL.KeylyratumThunb.;Totalsaponins;Diosgenin;Spectrophotometricmethod白英為茄科植物Sol

3、anumlyratumThunb.的干燥全草,性微寒,味苦。最早見于《本經(jīng)》記載,列為上品,為傳統(tǒng)中藥[1],具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、除濕等功效,用于治療癌癥腫瘤、皰疹、瘧疾、黃疸、水腫、淋病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、白帶異常等病證。白英含有多種化學(xué)成分,主要有甾體皂苷類、甾體生物堿類、有機酸類等化合物[2],其中皂苷類成分主要包括以薯蕷皂苷元、替高皂苷元、雅姆皂苷元等皂苷元為非糖部分的多種甾體皂苷。藥理研究顯示白英中總皂苷體內(nèi)外具有一定的抗腫瘤作用,且存在一定的選擇性[3]。因此,測定白英中總皂苷的含量對評價白英藥材質(zhì)量具有重要意義。總皂苷的測定方法有重量法[4~6]

4、,UV[7~9],TLCS[10],HPLC[11],GC-MS[12]法。目前有關(guān)白英中總皂苷的含量測定尚未見報道,本文建立了用UV測定白英中總皂苷含量的方法,并比較了24種不同來源的白英中總皂苷的含量,為白英的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。1儀器與材料紫外分光光度計(上海棱光技術(shù)有限公司)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE-52AA,上海亞榮儀器廠)、水浴鍋(鞏義市杜甫儀器廠)。薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所提供,I539-200001,含量測定用),無水乙醇(AR,天津百盛化工有限公司),甲醇(AR,山東禹王實業(yè)有限公司),三氯甲烷(AR,沈陽經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)試劑廠)

5、,鹽酸(AR,天津市大茂化學(xué)試劑廠),高氯酸(AR,天津市東方化工廠)。24種不同來源的白英藥材均由沈陽藥科大學(xué)孫啟時教授鑒定為茄科植物SolanumlyratumThunb.的干燥全草。2方法與結(jié)果2.1對照品溶液的制備精密稱定薯蕷皂苷元對照品約3mg,置于10ml容量瓶中,加甲醇溶解并定容即得。2.2樣品溶液的制備精密稱定1.0g白英藥材,置索氏提取器內(nèi),加60ml三氯甲烷脫脂2h后,揮去三氯甲烷溶劑;用200ml80%乙醇在80℃下提取至無色,將乙醇液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干;殘渣加2.5mol·L-1鹽酸50ml加熱回流3h,過濾;冷卻后用三氯甲烷分3次(30,2

6、0,20ml)回流萃取,15min/次;合并三氯甲烷萃取液,水洗至中性,水洗液再加入20ml三氯甲烷萃取,合并三氯甲烷萃取液,水浴蒸干溶劑,殘渣用甲醇溶解并定容至10.0ml即得。2.3吸收光譜的測定分別精密量取薯蕷皂苷元對照品溶液與樣品溶液1.0ml,置水浴中揮干溶劑,精密加入10.0ml高氯酸,搖勻。65℃水浴加熱15min,取出立即置于冰水浴中15min后,以空白作參比,在200~600nm波長范圍內(nèi)繪制吸收曲線,薯蕷皂苷元在405nm處有最大吸收,樣品溶液在405~412nm處有較強吸收,故選擇410nm作為測定波長。對照品與樣品圖譜分別見圖1,2。2

7、.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對照品溶液0.3,0.4,0.6,0.8,1.0ml,分別置于三角瓶中,揮干溶劑,精密加入10.0ml高氯酸,搖勻。65℃水浴加熱顯色15min,取出后立即置于冰水浴中15min后停止反應(yīng),以空白作參比,在410nm處測定吸光度值。計算得回歸方程為A=0.0276C+0.0055,r=0.9992,結(jié)果表明薯蕷皂苷元在8.91~29.70μg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。2.5正交實驗法對制備樣品溶液的優(yōu)選本實驗選定鹽酸濃度(mol/L)、乙醇體積分數(shù)(%)、水解時間(h)作為考察因素,每個因素各取3個水平,以總皂苷含量為評價

8、指標(biāo),應(yīng)用L9(34)正交表安排實驗。

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