開口箭總皂苷的含量測定

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1、開口箭總皂苷的含量測定【摘要】目的建立開口箭中總皂苷含量測定方法。方法采用比色法：香草醛-冰醋酸溶液為發(fā)色體系，檢測波長為（458±2）nm。結果標準曲線在0.10～0.40mg范圍內(nèi)(r=09997)線性關系良好。平均回收率97.2%，方法的變異系數(shù)為4.57%，測得開口箭70%乙醇提取物中總皂苷平均含量為13.51%。結論方法簡便，準確，重現(xiàn)性好，可用于開口箭總皂苷含量測定。【關鍵詞】開口箭總皂苷開口箭比色法　　Abstract:ObjectiveTosetupanassaymethodforthedeterminationoftotalsaponininTupistrachinen

2、sisBak.MethodsThesamplesinedbyspectrophotometry.Thedetective.ResultsThecalibrationcurvegandtheaveragerecoveryethodisreliable,accurate.ItcanbeusedforthequalitycontrolofthetotalsaponininTupistrachinensisBak.　　Keyetry;Spectrophotometry開口箭TupistrachinensisBak.系百合科（Liliaceae）鈴蘭族開口箭屬植物。其原植物又名開喉箭、萬年青，為多

3、年生常綠草本，以其根狀莖入藥，作為藥用又名巖七、竹根七、竹節(jié)參、竹根七、竹節(jié)七、牛尾七等。醫(yī)學古籍記載，開口箭味甘微苦，性寒，主治勞熱咳嗽、跌打損傷、風濕痹痛、月經(jīng)不調(diào)等癥。土家族民間用其漱口液治療咽喉炎、扁桃體炎，療效顯著［1］。我國開口箭屬植物約占全世界的70%,分布于陜西、甘肅、湖北、四川、云南、貴州等省。主產(chǎn)于湖北三峽庫區(qū)及神龍架林區(qū)，栽培面積大，產(chǎn)量高，資源十分豐富。本實驗室對神農(nóng)架產(chǎn)開口箭TupistrachinensisBak.的生藥學、化學成分和藥理活性進行了研究，結果表明開口箭正丁醇提取物對Hela，K562，A2780a等具有很好的抑制作用，細胞毒活性好，抗炎活性也很

4、好。也曾報道了“開口箭中甾體皂苷元的含量測定”［2］。本文進一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法測定開口箭中總皂苷含量的方法?！　?材料與儀器　　1.1材料　　開口箭根莖，采自湖北省神農(nóng)架林區(qū)，其原植物標本于200207采自同一地區(qū)，經(jīng)三峽大學化學與生命科學學院陳發(fā)菊副教授鑒定為TupistrachinensisBak.，原植物及藥材現(xiàn)保存于本實驗室（編號TC200207SNJ）?？傇碥諏φ掌?，本實驗室自開口箭分離純化的皂苷單體3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基(25R)-5(6)-烯-呋甾-3b,22a,26-三羥

5、基26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量>98%（HPLC測定）。其他試劑均為分析純。　　1.2儀器S3100紫外分光光度計（韓國Scinco公司），BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）。　　2方法　　2.1對照品、供試品溶液的制備　　2.1.1對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)干燥至恒重的開口箭總皂苷對照品0.0050g，加甲醇溶解定容至5ml，制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液?！　?.1.2供試品溶液的制備精密稱取開口箭粉末0.70g（60目篩，50℃干燥4h）置圓底燒瓶中，加入25ml70%乙醇溶液，浸泡過夜，60℃回流提取兩次，2h/次,減壓抽濾，濾液合并，置

6、蒸餾燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮，除盡溶劑后，加少量甲醇溶解，定容至25ml，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。　　2.2測定方法適量供試品溶液置干燥具塞試管，60℃水浴揮干溶劑后，精密加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，搖勻，置60℃恒溫水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中冷卻15min，加入5ml冰醋酸，搖勻，同時做空白，于（458±2）nm波長處測定吸光度值。　　2.3標準曲線的繪制與線性關系精密吸取對照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40ml，分別加入干燥具塞試管中，60℃水浴揮干溶劑,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋

7、酸溶液和0.8ml高氯酸，置60℃水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中15min，停止反應，加入5ml冰醋酸，搖勻，于458nm處測定吸光度，同時做試劑空白。以吸光度為縱坐標，以對照品質(zhì)量為橫坐標,繪制標準曲線,得線性回歸方程g范圍內(nèi)線性關系良好?！　?結果　　3.1精密度及重現(xiàn)性實驗精密吸取對照品溶液0.2ml,共6份，按“2.2”項下方法自60℃水浴揮干起測定（見表1）。其RSD為1.09%，表明方法精密度良好。精密稱取樣品