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1、甘草多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響論文.freelg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組,每組12只。對(duì)照組給予生理鹽水灌胃,實(shí)驗(yàn)組予以不同劑量甘草多糖灌胃,灌服小鼠7d,加強(qiáng)免疫后,.freelmunefunctioninmice.MethodsPolysacchayideGlycyrrhizauralensisbyethod.Ovalbuminiceasantigens.Themicelydividedintofourgroup：log/kg),middle(100mg/kg),high(200mg/kg)dosageg
2、roupofGPandnormalcontrolgroup,12miceineachgroup.Fourgroupsmunization,thelevelofantibodyandtheconcentrationofserumIFN-γined.ResultsThelevelsofantibodiesandcytokinesinmiddleandlomunefunctionofmice.Keymunomodulation；IFN-γ；mice甘草為豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)的干燥根及根莖。味甘,性平。入心、肺、脾、胃經(jīng)
3、。具有和中緩急、潤肺、解毒、調(diào)和諸藥之功效。主治脾胃虛弱、勞倦發(fā)熱、消化性潰瘍等。幾十年來人們發(fā)現(xiàn),從植物中提取的多糖不僅參與了細(xì)胞的各種生命現(xiàn)象的調(diào)節(jié),而且還與細(xì)胞表面的多糖體的介導(dǎo)有密切關(guān)系1。越來越多的藥理研究表明,多糖類化合物是一種免疫調(diào)節(jié)劑,它能激活免疫細(xì)胞,提高機(jī)體的免疫功能,且對(duì)正常細(xì)胞毒副作用較小2。筆者從甘草根中提取出甘草多糖(GlycyrrhizaPolysaccharide,GP),對(duì)灌服甘草多糖的小鼠免疫應(yīng)答水平進(jìn)行了檢測,探討甘草多糖的免疫調(diào)節(jié)作用。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物昆明種雄性小鼠48只,體重(20±2)g,大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心
4、提供,合格證號(hào)：SCXK(遼)2008-0002。1.2藥物甘草藥材購自大連國藥大藥房,經(jīng)大連藥品檢驗(yàn)所郭月秋主任藥師鑒定,為人工種植3～5年生甘草根側(cè)枝干燥切片。甘草多糖提取方法：稱取已干燥的甘草250g,加入適量80%乙醇過夜,回流提取3h脫脂,藥渣揮盡乙醇后,沸水提取2次,每次2h。合并提取液,濃縮至200mL,加95%乙醇使醇含量達(dá)到80%,于4℃冰箱中醇沉過夜。抽濾,濾渣依次用無水乙醇、丙酮洗滌,得到粗多糖。將粗多糖溶于水,用Sevage法除蛋白,反復(fù)進(jìn)行3次至無蛋白。流水透析后,蒸發(fā)濃縮至200mL,加95%乙醇使醇含量達(dá)到80%,于4℃冰箱中醇沉
5、過夜。抽濾,濾渣依次用無水乙醇、丙酮洗滌,真空干燥。即得甘草多糖,得率為4.02%。1.3儀器與試劑酶標(biāo)儀(美國OrganonTeknika公司)。生理鹽水(四川科倫大藥廠生產(chǎn)),批號(hào)A000586.08。小鼠IFN-γELISA試劑盒(深圳晶美生物工程有限公司)。1.4抗原制備取市售雞蛋,將殼擊碎后取卵清1∶5倍稀釋備用。2實(shí)驗(yàn)方法2.1分組及給藥取小鼠48只,隨機(jī)分為4組,每組12只,分別為甘草多糖低、中、高劑量組及對(duì)照組。進(jìn)行第1次免疫,注射卵清蛋白抗原,劑量為每只小鼠0.2mL,注射部位為腹股溝。注射抗原后的第3日開始給藥,實(shí)驗(yàn)組小鼠灌胃給予甘草多糖,
6、給藥量分別為50、100、200mg/(kg?d),對(duì)照組小鼠灌胃給予生理鹽水,劑量均為每只0.5mL,連續(xù)7d。第8日進(jìn)行第2次加強(qiáng)免疫(方法同第1次免疫),繼續(xù)灌胃給藥,1周后,小鼠斷頭采血,離心分離血清,分裝后備檢。2.2抗體效價(jià)測定2.2.1卵清蛋白抗體測定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),具體操作按文獻(xiàn)3進(jìn)行。以卵清蛋白包被酶標(biāo)板測定相應(yīng)抗體,以吸光值A(chǔ)表示抗體水平。2.2.2γ-干擾素測定采用小鼠IFN-γELISA試劑盒測定,所有操作均嚴(yán)格按試劑盒使用說明書進(jìn)行。待測血清作1∶10稀釋。IFN-γ檢測結(jié)果經(jīng)酶標(biāo)儀450nm波長測定A值,據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品
7、A值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以μg/L為單位,計(jì)算其含量。3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料,采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件,運(yùn)用方差分析進(jìn)行分析,統(tǒng)計(jì)結(jié)果以x±s表示,P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4結(jié)果(見表1、表2)表1甘草多糖對(duì)小鼠卵清蛋白抗體生成水平的影響(略)、注：與對(duì)照組比較,*P＜0.05,**P＜0.01(下同)表2甘草多糖對(duì)小鼠細(xì)胞因子IFN-γ生成水平的影響(略)5討論采用卵清蛋白激發(fā)小鼠的免疫系統(tǒng)為基礎(chǔ)免疫,然后用甘草多糖灌服小鼠,再用相同抗原激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,灌服中、低劑量甘草多糖的小鼠免疫應(yīng)答水平高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意
8、義；而高劑量甘草多糖對(duì)小鼠的免疫應(yīng)答水
