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1、西安和鄭州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因分型論文.freelor-phism，restrictionfragmentlengthAbstract:AIMToinvestigatethegenotypesofHCVintheHCVinfectedsamplesinXi’anandZhengzhou.METHODSGenotypesofHCVinedbyrestrictionfragmentlengthpolymorphism（RFLP）analysisofthe5’untranslatedregions（UTR）ofdifferentHCVs.F
2、orty-sixHCVRNAposi-tivesamplesfromXi’anandfortyfromZhengzhouongtheforty-sixsamplesfromXi’an:25/46（54.3%）ixed-genotypeongthosefromZhengzhou:19/40（47.5%）ixed-genotypeixed-genotypeinantisolatesaregenotype1b，folloolL-1異硫氰酸胍，25molL-1檸檬酸三鈉，pH7.0，0.1molL-12-巰基乙醇和5gL-1十二烷基肌氨酸鈉）裂解，等
3、體積水飽和酚，氯仿異戊醇抽提兩次后，乙醇沉淀，沉淀物溶于11μL1gL-1DEPC水，于70℃水溶變性10min，加入4μL5×M-MLVbuffer，1μL10molL-1dNTP，2μL0.1molL-1DTT，0.6μL隨機(jī)引物，16URNasin，200UM-MLV，總反應(yīng)體積為20μL，37℃水浴1h，合成cDNA.1.2.2HCVcDNA的套式PCR擴(kuò)增兩對(duì)引物H1/H2，H3/H4選自HCV5’NCR區(qū)基因，將反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行5’NCR套式PCR擴(kuò)增后得到一條252bp的擴(kuò)增片段.1.2.3限制性長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）第2輪P
4、CR產(chǎn)物純化回收，溶于50μLTE（pH8.0），取其8μL加入1μL10×酶反應(yīng)buffer，10U的如下內(nèi)切酶:（a）HaeⅢ（b）HinfI（c）Bsh1236I或（d）ScrFI，37℃保溫4h，消化產(chǎn)物40gL-1瓊脂糖膠電泳，EB染色后，紫外燈下觀察橙紅色熒光帶.1.2.45’NCR區(qū)限制性酶切圖譜的預(yù)測(cè)見Fig1.圖15’NCR區(qū)限制性酶切圖譜的預(yù)測(cè)略2結(jié)果2.1限制性酶切產(chǎn)物電泳圖譜見Fig2.圖25’NCR區(qū)RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物限制性酶切電泳圖譜略2.2RFLP基因分型結(jié)果2.2.1西安地區(qū)HCV基因型46例HCVRNA陽性
5、血清標(biāo)本中，25例（54.3%）為1b型，17例（37.0%）為2a型，4例（8.7%）為1b/2a混合感染.2.2.2鄭州地區(qū)HCV基因型40例HCVRNA陽性血清標(biāo)本中，1a型3例（7.5%），1b型19例（47.5%），2a型13例（32.5%），1b/2a混合感染4例（10.0%），1a/1b混合感染1例（2.5%）.3討論HCV基因組具有很高的變異性.根據(jù)HCV全基因序列或經(jīng)PCR擴(kuò)增后的基因序列片段的同源性，HCV可分為6型50多個(gè)亞型［1］，型間的變異程度可達(dá)33%［3］.越來越多的資料表明，不同型HCV的病毒血癥、病情嚴(yán)重程度
6、和對(duì)干擾素治療的反應(yīng)均各不相同，說明HCV基因的變異可能與丙肝的慢性化及HCV相關(guān)的肝細(xì)胞癌的發(fā)生密切相關(guān).目前對(duì)世界各地獲得的HCV病毒株的基因型別分析表明，不同型HCV有一定的地區(qū)分布［4］.如歐美國(guó)家HCV1-3型常見，其中1a型占絕大多數(shù);遠(yuǎn)東包括中國(guó)、日本的大部分地區(qū)，1b，2a，2b型常見，1b型為主要的優(yōu)勢(shì)株;3型主要分布在印度、巴基斯坦、泰國(guó)和新加坡等國(guó)家;4a型主要分布在中東、埃及和中非地區(qū);5a型以南非地區(qū)為主;6a型則僅在越南、馬來西亞等東南亞國(guó)家及中國(guó)的香港、澳門發(fā)現(xiàn).我們報(bào)道了西安和鄭州地區(qū)的HCV基因型分布，發(fā)現(xiàn)兩
7、地患者中HCV型分布基本相似，均以1b型為主，其次為2a型，并有一定的混合感染.同北京［5］、烏魯木齊［6］、廣州［7］、貴州［8］、泰安［9］等地報(bào)道結(jié)果相比，西安與鄭州地區(qū)2a型所占比例偏高，分別為36.96%和32.50%..ThepletecodingsequenceofhepatitisCvirusgenotype5a，thepredominentgenotypeinSouthAfrica［J］.BiochemBiophysResmunicat，1997;236（1）:44-49.［5］TangXM，SongHB，Lied），199
8、7;4（3）:135-136.［6］，ZhaiQ，SunHM，ZhangYX.StudyofHCVgenotypesined），1997;14（5）:265-266
