從血液中提取dna方法探討

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1、從血液中提取DNA方法探討［摘要］目的：研究從血液中提取DNA的方法以應(yīng)用。方法：靜脈抽取血樣，分別抗凝或不加抗凝處理后，提取DNA，通過電泳和PCR進(jìn)行檢測。結(jié)果：凝血和抗凝血的DNA產(chǎn)量和純度分別是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L，(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有樣本的DNA分子量都很高，從兩者的DNA樣本中能很容易地擴(kuò)增出tPA基因的第8內(nèi)含子區(qū)Alu等位基因二態(tài)性，因此所提取的DNA是完整可靠的。結(jié)論：該方法能快速、簡單

2、、有效、無毒地從新鮮血液和凝血中提取DNA，適合于臨床檢測和分子生物學(xué)研究?！　。坳P(guān)鍵詞］DNA提取;血液;DNA檢測　　DNAIsolationbySimpleRapidandInnocuousMethodfromBloodUsefulinClinicalMolecularTesting　　Abstract:ObjectiveTostudythemethodofDNAisolationfrombloodforapplication.MethodsDNAinatedbyagarosegelelectrophoesisandPC

3、RfromantiagglutinatingandagglutinatingbloodsamplesthatauricularvEins.ResultsTheyieldsandpurityofDNAisolatedfromclottedbloodandantiagglutinatingbloodgDNA/Lbloodand(1.87±0.11)，(39.1±10.2)mgDNA/Lbloodand(1.92±0.12).TheDNAthatallsampleshashighmolecularorphismofAluallele

4、softhe8thintronoftPAethodisrapid,easy,efficientandinnocuousforisolationofDNAfromclottedandfreshbloodanditissuitforclinicaltestingandmolecularbiologystudy.　　Keyination　　常規(guī)的臨床檢測實驗室中往往要收集大量的未凝結(jié)血液，而將凝血丟掉。分子生物學(xué)實驗中，常用來自EDTA抗凝或枸椽酸鈉抗凝的外周血來做DNA來源［1，2］,由于抗凝劑的加入,往往使血漿不能用于檢測其他

5、項目。分離完白血球后，多數(shù)程序要用酶法消化細(xì)胞，然后是用對人體有害的有機(jī)溶劑(如酚氯仿)抽提及用乙醇沉淀［3］。為了減少實驗檢測血液的用量，已有些報道從凝血中提取DNA［3～5］，然而這些技術(shù)有些比較不實用，易造成污染，或者比較耗時，要用到酶、RNA去除步驟；有些要求樣本體積大，所需試劑在常規(guī)的實驗室中不具備使用條件等。我們經(jīng)多次實驗并參考其他資料，優(yōu)化出一種不需要酶而且不使用有機(jī)溶劑抽提的程序，能有效地從新鮮血液和凝血中提取DNA，適用于臨床檢測及分子生物學(xué)實驗?！　?材料和方法　　1.1樣本來源靜脈抽取30份健康體檢者血

6、樣。10份用EDTA抗凝,10份不加抗凝處理，10份不抗凝在-40℃凍存2a左右。　　1.2DNA提取方法取凝血塊，用9g/L氯化鈉勻漿大約30s，每換一個樣本都要用70%乙醇和9g/L氯化鈉清洗勻漿器以避免交叉污染。取勻漿后樣本1ml置于離心管中，室溫8000r離心5min后，去掉上層。血細(xì)胞在1ml的Tris緩沖液I(10mmol/LTrisHCl，pH8.0；10mmol/L氯化鉀；10mmol/L氯化鎂；2mmol/LEDTA，pH8.0；25mL/LTritonX100)中裂解10min,其間輕輕用力充分混勻,室

7、溫10000r離心2min，沉淀要用Tris緩沖液I洗2次。將沉淀用220μl的Tris緩沖液II(10mmol/LTrisHCl，pH8.0；10mmol/L氯化鉀；10mmol/L氯化鎂；2mmol/LEDTA，pH8.0；0.4mol/L氯化鈉；10g/LSDS)懸浮，輕輕振蕩試管,使底部細(xì)胞團(tuán)塊散開，在56℃保溫15min裂解。加入100μl5M氯化鈉充分振蕩沉淀去除蛋白質(zhì)。10000r離心5min，取上清。加2.5倍體積的無水乙醇沉淀DNA后，10000r離心5min，棄上清。室溫晾20min左右待酒精揮發(fā)干凈后以

8、適量TE緩沖液(10mmol/LTrisHCl，pH8.0，1mmol/LEDTA)回溶。EDTA抗凝血中DNA的提取從去掉上層開始。　　1.3DNA濃度檢測用分光光度計在260nm測DNA濃度?！　?.4DNA純度檢測DNA的純度用A260/A280比值表示［3］。結(jié)果以