從血液中提取dna方法探討

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1、從血液中提取DNA方法探討〔摘要〕目的：研究從血液中提取DNA的方法以應(yīng)用。方法：靜脈抽取血樣，分別抗凝或不加抗凝處理后，提取DNA，通過(guò)電泳和PCR進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：凝血和抗凝血的DNA產(chǎn)量和純度分別是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L，(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有樣本的DNA分子量都很高，從兩者的DNA樣本中能很容易地?cái)U(kuò)增出tPA基因的第8內(nèi)含子區(qū)Alu等位基因二態(tài)性，因此所提取的DNA是完整可靠的。結(jié)論：該方法能快速、簡(jiǎn)單、有效、無(wú)毒地從新鮮血液和凝血中提取DNA，適合于臨床檢測(cè)和分

2、子生物學(xué)研究?！　　碴P(guān)鍵詞〕DNA提取;血液;DNA檢測(cè)　　DNAIsolationbySimpleRapidandInnocuousMethodfromBloodUsefulinClinicalMolecularTesting　　Abstract:ObjectiveTostudythemethodofDNAisolationfrombloodforapplication.MethodsDNAinatedbyagarosegelelectrophoesisandPCRfromantiagglutinatingandagglutinatingbloodsamplesthatauricula

3、rveins.ResultsTheyieldsandpurityofDNAisolatedfromclottedbloodandantiagglutinatingbloodgDNA/Lbloodand(1.87±0.11)，(39.1±10.2)mgDNA/Lbloodand(1.92±0.12).TheDNAthatallsampleshashighmolecularorphismofAluallelesofthe8thintronoftPAethodisrapid,easy,efficientandinnocuousforisolationofDNAfromclottedandfr

4、eshbloodanditissuitforclinicaltestingandmolecularbiologystudy.　　Keyination　　常規(guī)的臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中往往要收集大量的未凝結(jié)血液，而將凝血丟掉。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用來(lái)自EDTA抗凝或枸椽酸鈉抗凝的外周血來(lái)做DNA來(lái)源〔1，2〕,由于抗凝劑的加入,往往使血漿不能用于檢測(cè)其他項(xiàng)目。分離完白血球后，多數(shù)程序要用酶法消化細(xì)胞，然后是用對(duì)人體有害的有機(jī)溶劑(如酚氯仿)抽提及用乙醇沉淀〔3〕。為了減少實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血液的用量，已有些報(bào)道從凝血中提取DNA〔3～5〕，然而這些技術(shù)有些比較不實(shí)用，易造成污染，或者比較耗時(shí)，要用到酶、R

5、NA去除步驟；有些要求樣本體積大，所需試劑在常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室中不具備使用條件等。我們經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)并參考其他資料，優(yōu)化出一種不需要酶而且不使用有機(jī)溶劑抽提的程序，能有效地從新鮮血液和凝血中提取DNA，適用于臨床檢測(cè)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。　　1材料和方法　　1.1樣本來(lái)源靜脈抽取30份健康體檢者血樣。10份用EDTA抗凝,10份不加抗凝處理，10份不抗凝在-40℃凍存2a左右?！　?.2DNA提取方法取凝血塊，用9g/L氯化鈉勻漿大約30s，每換一個(gè)樣本都要用70%乙醇和9g/L氯化鈉清洗勻漿器以避免交叉污染。取勻漿后樣本1ml置于離心管中，室溫8000r離心5min后，去掉上層。血細(xì)胞在1ml的Tr

6、is緩沖液I(10mmol/LTrisHCl，pH8.0；10mmol/L氯化鉀；10mmol/L氯化鎂；2mmol/LEDTA，pH8.0；25mL/LTritonX100)中裂解10min,其間輕輕用力充分混勻,室溫10000r離心2min，沉淀要用Tris緩沖液I洗2次。將沉淀用220μl的Tris緩沖液II(10mmol/LTrisHCl，pH8.0；10mmol/L氯化鉀；10mmol/L氯化鎂；2mmol/LEDTA，pH8.0；0.4mol/L氯化鈉；10g/LSDS)懸浮，輕輕振蕩試管,使底部細(xì)胞團(tuán)塊散開(kāi)，在56℃保溫15min裂解。加入100μl5M氯化鈉充分振蕩

7、沉淀去除蛋白質(zhì)。10000r離心5min，取上清。加2.5倍體積的無(wú)水乙醇沉淀DNA后，10000r離心5min，棄上清。室溫晾20min左右待酒精揮發(fā)干凈后以適量TE緩沖液(10mmol/LTrisHCl，pH8.0，1mmol/LEDTA)回溶。EDTA抗凝血中DNA的提取從去掉上層開(kāi)始?！　?.3DNA濃度檢測(cè)用分光光度計(jì)在260nm測(cè)DNA濃度。　　1.4DNA純度檢測(cè)DNA的純度用A260/A280比值表示〔3〕。結(jié)果以