中藥免疫調(diào)節(jié)劑對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

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1、中藥免疫調(diào)節(jié)劑對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響作者：劉翠艷,趙宏坤，韓春楊【關(guān)鍵詞】中藥免疫調(diào)節(jié)劑;,小鼠;,脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化;,含藥血清　　[摘要]目的:探討中藥免疫調(diào)節(jié)劑對(duì)正常小鼠及環(huán)磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠細(xì)胞免疫功能的影響。方法:以Cy誘導(dǎo)建立免疫抑制小鼠模型,給正常小鼠和免疫抑制小鼠飲服中藥及生理鹽水,采用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)情況。結(jié)果:試驗(yàn)各組小鼠脾細(xì)胞在48h培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率與各組含藥血清加入到正常小鼠脾細(xì)胞反應(yīng)體系中,在相同培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率呈高度正相關(guān)。表現(xiàn)為:在機(jī)體正常條件

2、下,兩個(gè)中藥組與正常組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,但均高于Cy組（P<0.05）;在免疫抑制條件下,兩個(gè)中藥組明顯高于正常對(duì)照組和Cy組（P<0.05）,且中藥免疫調(diào)節(jié)劑組優(yōu)于玉屏風(fēng)組（P<0.05）;另外,50mL/L濃度的含藥血清優(yōu)于100mL/L濃度的含藥血清（P<0.05）。結(jié)論:該中藥免疫調(diào)節(jié)劑能顯著促進(jìn)免疫抑制小鼠淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,而對(duì)正常小鼠作用不明顯?！　關(guān)鍵詞]中藥免疫調(diào)節(jié)劑;小鼠;脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化;含藥血清　　目前,國內(nèi)外在中藥免疫調(diào)節(jié)劑的研究開發(fā)方面,研究

3、單味藥和其所含的單體成分（最多的是多糖,其次為有機(jī)酸、甙類、生物堿、黃酮等）占多數(shù)[1-3],復(fù)方研究較少且不深入。但是,正是復(fù)方制劑的復(fù)雜成分才獲得了單味藥和單體成分所不具備的藥效整體性和協(xié)同互補(bǔ)作用,使療效增強(qiáng)、毒副作用減少,在實(shí)際應(yīng)用中更具優(yōu)勢(shì)。為此,我們根據(jù)中藥方劑的組成原則,結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究成果,以具有免疫調(diào)節(jié)作用的經(jīng)典方劑“玉屏風(fēng)散”為對(duì)照,通過體外篩選、毒性測(cè)定,最后由黃芪、茯苓、白術(shù)、甘草、防風(fēng)、桔梗6味藥組成了復(fù)方中藥免疫調(diào)節(jié)劑,并用MTT法探討了該中藥免疫調(diào)節(jié)劑對(duì)正常小鼠及Cy所致免疫抑制小鼠

4、細(xì)胞免疫功能的影響?！　?材料和方法　　1.1材料RPMI1640培養(yǎng)基（Gibco公司）;MTT（四甲基偶氮唑鹽,Amresco公司）,以pH7.2的RPMI1640培養(yǎng)液制成5g/L溶液;PHA（Sigma公司）,以pH7.2的RPMI1640培養(yǎng)液制成200mg/L溶液;小牛血清(杭州四季青生物工程有限公司,批號(hào):051215);環(huán)磷酰胺（Cy,上海華聯(lián)制藥有限公司,批號(hào):050306）;中藥免疫調(diào)節(jié)劑（ZY）:黃芪、茯苓、白術(shù)、防風(fēng)、甘草、桔梗組成復(fù)方免疫調(diào)節(jié)劑,采用自動(dòng)循環(huán)煎藥機(jī)提取濃縮,按照生藥量計(jì)算使

5、終濃度為300g/L,購自山東泰安工商聯(lián)醫(yī)藥商行。玉屏風(fēng)散（YPF）:選自《中國獸藥典》;MC0175型CO2恒溫培養(yǎng)箱（日本SANYO）;COIC3168型倒置相差顯微鏡（重慶光學(xué)儀器廠）;2010型BLOCELLHT系列酶標(biāo)儀（鄭州博塞生物工程有限責(zé)任公司）;SI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度至5×109/L,并用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力>95%。　　1.2.4脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的測(cè)定　　1.2.4.1含藥血清對(duì)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響當(dāng)血清濃度為50mL/L時(shí),在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,每孔加入50μL5×1

6、09/L小鼠脾淋巴細(xì)胞,45μL不含血清的RPMI1640及5μL含藥血清;當(dāng)血清濃度為100mL/L時(shí),在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,加入50μL5×109/L小鼠脾淋巴細(xì)胞,40μL不含血清的RPMI1640液及10μL含藥血清。每組血清設(shè)4個(gè)重復(fù)孔,并與同等濃度的小牛血清RPIM1640液作比較,同時(shí)設(shè)培養(yǎng)液空白對(duì)照?！　?.2.4.2各試驗(yàn)組小鼠脾細(xì)胞的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上,每孔加入用含100mL/L小牛血清RPMI1640稀釋的5×109/L小鼠脾淋巴細(xì)胞95μL,A、B、C、D4橫排各孔均加入不

7、含血清的RPMI1640液5μL,E、F、G、H4橫排各孔均加入200mg/L的PHA5μL,每組細(xì)胞設(shè)4個(gè)重復(fù)孔,并用含100mL/L小牛血清的RPMI1640作空白對(duì)照。上述細(xì)胞均置37℃、50mL/LCO2及飽和濕度下培養(yǎng)44h,各孔加5g/L的MTT10μL,繼續(xù)培養(yǎng)4h后,加入SDSDMF溶解液50μL,30min后用酶標(biāo)儀測(cè)A570,結(jié)果用刺激指數(shù)（SI）表示:SI＝試驗(yàn)孔A均值/對(duì)照孔A均值×100%?！　?.2.5數(shù)據(jù)處理應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS10.0進(jìn)行分析,所有數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示?！?/p>

8、　2結(jié)果　　2.1各組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化結(jié)果Cy對(duì)照組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的A570值明顯低于正常對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<005）;中藥免疫調(diào)節(jié)劑組和玉屏風(fēng)散組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的A570值與正常對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;而Cy+中藥免疫調(diào)節(jié)劑組和Cy+玉屏風(fēng)散組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的A570值明顯高于正常對(duì)照組（P<0.05）