靶向肝脾巨噬細(xì)胞治療血小板減少性紫癜的實(shí)驗(yàn)研究

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1、靶向肝脾巨噬細(xì)胞治療血小板減少性紫癜的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】本研究制備兔抗鼠血小板血清以建立SD大鼠免疫性血小板減少性紫癜（ITP）模型，使用明膠微粒裝載二氯亞甲基二膦酸（Cl2MDP），并將藥物導(dǎo)向模型的肝脾巨噬細(xì)胞內(nèi)以殺傷巨噬細(xì)胞或降低其免疫活性，以期達(dá)到治療ITP的目的。每24小時(shí)重復(fù)注射1次抗血小板血清150μl，所建立的SD大鼠的ITP模型中，血小板計(jì)數(shù)于實(shí)驗(yàn)期間能維持在低于50×109/L的病理水平。用Cl2MDP明膠微粒進(jìn)行巨噬細(xì)胞株RATT試驗(yàn)及模型的實(shí)驗(yàn)性治療，以治療前后的血小板計(jì)數(shù)和出血時(shí)間作為療效的觀察指標(biāo)。結(jié)果表明：Cl2

2、MDP明膠微粒呈劑量依賴關(guān)系抑制體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞的增殖并可迅速、有效地升高模型鼠血小板的數(shù)量，平均達(dá)180×109/L水平，并能維持血小板計(jì)數(shù)在生理范圍內(nèi)而不下降。此外，預(yù)先注射Cl2MDP明膠微粒的SD大鼠可避免抗血小板血清引起的血小板計(jì)數(shù)降低。結(jié)論：Cl2MDP明膠微粒靜脈注射可以有效地提高SD大鼠ITP模型的血小板數(shù)量，達(dá)到避免發(fā)生出血的安全水平。這種靶向巨噬細(xì)胞的藥物輸送技術(shù)為ITP的治療提供了一種新的治療理念和方法，值得進(jìn)一步深入研究?！娟P(guān)鍵詞】免疫性血小板減少性紫癜二氯亞甲基二膦酸鹽明膠微粒巨噬細(xì)胞靶向治療Experime

3、ntalStudyforThrombocytopenicPurpuraTherapybyTargetingMacrophagesinLiverandSpleenAbstractThestudypurposeethylenediphosphonate(Cl2MDP)loadedgelatinparticlescaninducethedepletionofmacrophageinreticuloendothelialsystemofliverandspleenorcandepresstheimmunityofmacrophageinSDratm

4、odelsofimmunethrombocytopenicpurpura(ITP)totreattheITPrats.Nemunized,andtheserumodel.InexperimentalITPmodels,150μlofantiplateletserumaintainedpathologicallevelandodelsduringexperimentprocess.TheMTTtestofmacrophageRADPloadedgelatinparticlesinvitro.Afterintravenousinjection

5、ofagroupdoseofCl2MDPgelatinparticles,theplateletcountsoftheratseasuredatthetimeof4hours,24hours,48hours,72hoursand96hours,respectively,andbleedingtimesodelstomeanof180×109/L,aphysiologicallevelin24hoursafterinjection,andkeptthisplateletlevelthroughore,ratspretreated.Itisc

6、oncludedthatCl2MDPloadedgelatinparticlesrestrainmultiplicationofmacrophageRADP明膠微?；A(chǔ)上［6］，進(jìn)行巨噬細(xì)胞株RATT試驗(yàn)及治療SD大鼠ITP的初步實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果令人滿意。主要試劑明膠微粒（粒徑300-500nm、表面帶8.9mV正電荷的Zeta電位）由華東理工大學(xué)超細(xì)材料制備與應(yīng)用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制備；二氯亞甲基二瞵酸鹽（Cl2MDP，Sigma公司產(chǎn)品），四甲基偶氮唑鹽（MTT，Sigma公司產(chǎn)品），DMSO（Sigma公司產(chǎn)品），DMEM（Gibco公

7、司產(chǎn)品），胰酶EDTA（Gibco公司產(chǎn)品），青霉素、鏈霉素（Gibco公司產(chǎn)品），胎牛血清（FCS，Gibco公司產(chǎn)品）；其余所用試劑均為國產(chǎn)，分析純。細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物RADP明膠微粒的制備［6］明膠微粒對(duì)藥物的包封、肝脾靶向性和生物相容性研究在我科實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，載藥（Cl2MDP）量為5mg/mg明膠微粒。巨噬細(xì)胞的MTT試驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)巨噬細(xì)胞株RAEM培養(yǎng)液于37℃、5%CO2中孵育24小時(shí)。移去培養(yǎng)液及未貼壁細(xì)胞，再加入培養(yǎng)液繼續(xù)孵育至細(xì)胞長滿培養(yǎng)皿底。以0.25%胰酶+EDTA消化30秒，制成細(xì)胞懸液傳代，至細(xì)胞長滿培養(yǎng)皿底后再次制

8、成細(xì)胞懸液進(jìn)行MTT試驗(yàn)。MTT試驗(yàn)①鋪板：在24孔培養(yǎng)板中加入細(xì)胞懸液，使實(shí)際鋪板細(xì)胞數(shù)為每孔106個(gè)。于37℃、5%CO2孵育24小時(shí)使巨噬細(xì)胞貼壁。②干預(yù)：將