鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性及耐藥基因的研究

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1、鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性及耐藥基因的研究【摘要】目的研究鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性與耐藥基因之間的關(guān)系。方法用VITEK-2型全自動(dòng)微生物分析儀,檢測(cè)331株鮑曼不動(dòng)桿菌和42株多重耐藥菌的藥敏情況,用PCR方法檢測(cè)多重耐藥菌的耐藥基因。結(jié)果鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)21種抗生素的平均耐藥率分別為59.8%和62.8%；對(duì)頭孢曲松、頭孢唑啉和頭孢替坦的耐藥率均為100%；42株多重耐藥菌株（100%）對(duì)頭孢曲松、頭孢呋辛鈉、頭孢呋辛酯、頭孢唑啉、頭孢替坦和氨芐西林完全耐藥,且均檢測(cè)有TEM-1和ampC基因;38株多重耐藥菌均檢測(cè)到TEM-1、am

2、pC、aac（3）和gyrA型基因。結(jié)論鮑曼不動(dòng)桿菌已成為醫(yī)院重要致病菌,且多重耐藥率很高，與攜帶的TEM-1、ampC、aac（3）和gyrA型基因有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】鮑曼不動(dòng)桿菌;多重耐藥基因;耐藥基因檢測(cè)StudyonantibioticsresistanceandresistantgenesofAciobacterbaumanniiXUJing-feng，XU-Lin,FANilitarymand,Beijing100700，China【Abstract】ObjectiveObjectiveTostudytherela

3、tionshipbetannii.MethodsTheantibioticresistanceandresistantgeneinedbypolymerasechainreaction（PCR）andultiresistanceofAciobacterbaumannii.ResultsTheresistanceratesofAciobacterbaumanniitoceftriaxone、cefotetan、cefazolinipenem、meropenemultiresistantisolatespCgene;38str

4、ainsultiresistantisolatesofTEM-1、ampC、aac（3）andgyrAgene.ConclusionThemultiresistanceofAciobacterbaumanniihascloserelationtoconitantpresenceofTEM-1、ampC、aac（3）andgyrAgene.【Keyannii;drugmultiresistant;drugresistantgenedetection鮑曼不動(dòng)桿菌已成為醫(yī)院獲得性肺炎的重要致病菌,且很容易在監(jiān)護(hù)病房流行。由于鮑曼

5、不動(dòng)桿菌在自然界的廣泛存在及其復(fù)雜的耐藥機(jī)制,對(duì)β內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類以及喹諾酮類抗生素已呈現(xiàn)多重耐藥，給臨床治療其所致感染帶來(lái)很大困難。為能更好地指導(dǎo)臨床選擇合適的抗生素，本文對(duì)本院2005～2006年住院患者標(biāo)本分離的331株鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行藥敏分析,并對(duì)2006年分離的42株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的基因進(jìn)行測(cè)序和研究,現(xiàn)報(bào)告如下。1材料與方法1.1菌株來(lái)源331株鮑曼不動(dòng)桿菌均為我院臨床標(biāo)本中分離并按全國(guó)統(tǒng)一操作規(guī)程［1］。標(biāo)本主要包括血液、尿液、痰和其他分泌物。1.2儀器試劑VITEK-2型全自動(dòng)微生物分析儀、ID-

6、GN鑒定卡、AST-GN09藥敏卡由法國(guó)Bio-Merieux公司生產(chǎn);VITEK比濁計(jì)（V1210）由日本生產(chǎn)；PCR擴(kuò)增儀為美國(guó)PERKINELMER公司9600型基因擴(kuò)增儀；日本三洋MDF型超低溫冰箱;德國(guó)Hettich公司22R型低溫超速離心機(jī);美國(guó)水套式恒溫培養(yǎng)箱。1.3菌種鑒定、藥敏所有實(shí)驗(yàn)菌株分離純化后按VITEK-2的使用要求配制成菌懸液和稀釋液,分別填充到ID-GN和AST-GN09卡中,用VITEK-2儀器自動(dòng)完成細(xì)菌的鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)。1.4質(zhì)控菌株由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌（ATCC

7、25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）,藥敏質(zhì)控結(jié)果符合NCCLS藥敏質(zhì)控要求。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理［2］細(xì)菌耐藥性分析用-26型大腸埃希菌分別作SHV型和TEM型陽(yáng)性對(duì)照；其余ampC、PER-1、OXA-23基因陽(yáng)性對(duì)照均為北京華明公司基因檢測(cè)室經(jīng)基因測(cè)序后比對(duì)的陽(yáng)性菌株。1.7PCR耐藥菌基因［3］根據(jù)GenBank提供的耐藥基因，采用Primer軟件設(shè)計(jì)引物（見(jiàn)表1）。反應(yīng)體系均為25μl,其中緩沖液2.5μl,10mmol/L4×dNTP0.5μl,50μmol/上下游引物各1μl,DNA多聚酶0.25μl

8、,DNA模板1μl,超純水18.75μl。根據(jù)不同引物設(shè)立不同PCR反應(yīng)條件。以ATCC700603肺炎克雷伯菌作SHV型陽(yáng)性對(duì)照，以TEM-26型大腸埃希菌作TEM型陽(yáng)性對(duì)照,產(chǎn)物經(jīng)電泳,在紫外線下觀察結(jié)果,并在凝膠上成像。表1用于檢測(cè)各種耐藥基因的引物（略）2結(jié)果與分析2.1鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床分布本