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1、關(guān)于生防木霉拮抗黃瓜枯萎病菌的初步研究摘要木霉是一種重要的生防菌,對(duì)黃瓜枯萎病菌有很強(qiáng)的拮抗作用,主要作用方式有:競(jìng)爭(zhēng)、重寄生、抗生、溶菌作用。溫室盆栽試驗(yàn)顯示,木霉可顯著防治黃瓜枯萎病菌。關(guān)鍵詞木霉;黃瓜枯萎病菌;生防 木霉(Trichodermaspp.)屬真菌界、雙核菌門、半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科、真菌屬,是迄今為止研究和應(yīng)用最多的一類生防菌[1]。木霉的生防機(jī)制復(fù)雜,主要包括競(jìng)爭(zhēng)、重寄生、抗生、溶菌等[2]。研究木霉對(duì)病原菌的作用機(jī)制及防治效果,可以優(yōu)選木霉菌株,從而提高生防效率?！ ?材料與方法 1.1試驗(yàn)材料 以病株
2、上分離的黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)為拮抗對(duì)象,土壤中分離的木霉菌株為拮抗菌?！ ?.2試驗(yàn)方法 1.2.1競(jìng)爭(zhēng)作用。采用對(duì)峙培養(yǎng)法[3],在直徑為9cm的PDA平板一側(cè)接種直徑為5mm的病原真菌菌絲塊,在平板另一側(cè)接種拮抗菌,28℃共培養(yǎng),觀察兩菌的生長(zhǎng)情況。 1.2.2重寄生作用。在PDA培養(yǎng)基中央放置1塊20mm×20mm無菌蓋玻片,在左側(cè)距蓋玻片40mm處接種木霉,右側(cè)距蓋玻片20mm處接種黃瓜枯萎病菌,28℃恒溫培養(yǎng)。取下蓋玻片,于顯微鏡下觀察菌絲體的作用方式?！ ?.2.3抗生作用。在裝
3、有100mLPDB的三角瓶中接入直徑5mm的木霉菌塊,28℃、150rpm培養(yǎng)6d,取濾液離心后過0.22μm細(xì)菌濾器。在90mL、45℃的PDA中加入10mL上述濾液,搖勻倒成平板,接種直徑為5mm的黃瓜枯萎病菌菌塊。28℃恒溫培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況?！ ?.2.4溶菌作用。將培養(yǎng)4d的木霉發(fā)酵液8000rpm離心10min。取15mL上清液倒入培養(yǎng)皿中,接入黃瓜枯萎病菌菌塊。淺層培養(yǎng)5d后觀察生長(zhǎng)情況。以高溫滅菌的木霉上清液中培養(yǎng)的病菌菌塊為對(duì)照。1.2.5盆栽試驗(yàn)。將黃瓜種子經(jīng)70%乙醇消毒1min,2%NaClO消毒5min,55℃溫水浸15~20min,
4、25℃浸泡2~3h,無菌水沖洗3次,25~30℃下催芽1~2d。將黃瓜枯萎病菌接種到麩皮∶玉米粉為3∶1的培養(yǎng)基中,28℃恒溫箱中培養(yǎng)至長(zhǎng)滿整個(gè)三角瓶。將催芽基本一致的黃瓜苗在木霉菌懸液(約1×108cfu/mL)中浸1h,取出于滅菌濾紙片上干燥1h后,播種于拌有黃瓜枯萎病菌制劑的土壤中。以無菌水浸種處理為對(duì)照?！?結(jié)果與分析 2.1競(jìng)爭(zhēng)作用 平皿對(duì)峙試驗(yàn)顯示,木霉生長(zhǎng)迅速,可快速占據(jù)空間,有很強(qiáng)的生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì),能有效抑制黃瓜枯萎病菌的生長(zhǎng)?！ ?.2重寄生作用 顯微鏡下觀察到木霉菌絲體纏繞著黃瓜枯萎菌絲生長(zhǎng),并在病菌菌絲上產(chǎn)生大量分枝,產(chǎn)生寄生
5、作用。 2.3抗生作用 在PDA培養(yǎng)基中加入10%的木霉發(fā)酵液后,黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)不旺盛,與對(duì)照有顯著的差異?！ ?.4溶菌作用 在未滅菌的木霉上清液中培養(yǎng)的黃瓜枯萎菌塊,僅有細(xì)小菌絲的生長(zhǎng),數(shù)量較少;而在滅菌后的上清液中,黃瓜枯萎菌生長(zhǎng)旺盛,形成大塊菌絲團(tuán)。 2.5盆栽防效試驗(yàn) 盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照相比,木霉浸種處理的黃瓜幼苗死亡率為25.0%,顯著低于對(duì)照的66.7%?！ ?結(jié)論與討論 作為安全而環(huán)境友好的生防因子,木霉在田間的施用可有效地防治作物病害,從而避免大量使用農(nóng)藥導(dǎo)致病原菌抗藥性的產(chǎn)生、作物農(nóng)藥含量超標(biāo)及環(huán)
6、境污染等問題[4-6]。因此,對(duì)木霉生防機(jī)制深入而全面的研究,將對(duì)綠色農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展產(chǎn)生重要的推動(dòng)作用?！ ?
