rphplc法測定小鼠血漿中蒿甲醚的濃度論文

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1、RPHPLC法測定小鼠血漿中蒿甲醚的濃度論文【摘要】目的建立測定小鼠血漿中蒿甲醚濃度的方法。方法采用RPHPLC法，色譜柱為DiamonsilC18柱（150mm×4.6mm,5μm），流動相為甲醇水（體積比85∶15）；流速為1.0mL/min；檢測波長為210nm；柱溫為室溫。利用甲基叔丁基醚對小鼠血漿及組織中蒿甲醚及蒿乙醚進行提取后進行測定。結(jié)果蒿甲醚與蒿乙醚的色譜峰分離良好并且出峰時間相近，以蒿乙醚為內(nèi)標測定血漿中蒿甲醚符合方法學要求，血漿標準曲線在一定范圍內(nèi)線性關系良好（R2=0.9991,n=5）,高、中、低3個濃度的

2、回收率均為97%以上，日內(nèi)及日間RSD均小于3%。結(jié)論建立的方法可簡單快速測定蒿甲醚在小鼠血漿中的濃度，為內(nèi)標法測定蒿甲醚在動物血漿中的濃度提供思路?！娟P鍵詞】蒿甲醚；蒿乙醚；高效液相色譜法；內(nèi)標法；血藥濃度ContentanalysisofartemetherinmiceplasmabyRPHPLCethodsArtemetherandarteehterinmiceplasmaethyltertbutyletherbeforedetection,thenanalyzedonaDiamonsilC18column（150mm×4.6

3、mm,5μm）.ThemobilephaseconsistedofmethanolL/min.Theandroomtemperatureinationofartemether.ResultsThechromatographicpeaksofartemetherandarteetherilarretentiontimesattheselectedHPLCcondition.Thereetheranalysisorethan96%duringhigh,middleandloether.RSDsofetherinplasmacouldbea

4、nalyzedeasilyandrapidlybytheestablishedHPLCmethod.Keyether;arteether;HPLC;innerstandardmethod;blooddruglevel青蒿素（qinghaosu,.freelether,ARM)近年來頗為引人關注.freelether(B)andarteether(C)1儀器與試藥1.1儀器高效液相色譜儀（LC10ATVP泵，SPD10AVP紫外檢測器，日本島津公司），TGL16G高速微型臺式離心機（上海醫(yī)分儀器制造有限公司），802離心機（金壇市

5、榮華儀器制造有限公司），XE,國藥試劑集團）。1.3實驗動物昆明種小白鼠：沈陽藥科大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（遼)2003-008。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：DiamonsilC18柱（150mm×4.6mm,5μm,迪馬科技有限公司）；流動相：甲醇水（體積比85∶15）；流速：1.0mL/min；檢測波長：210nm；柱溫：室溫30℃;進樣量：20μL。2.2血漿樣品的處理取昆明種小鼠數(shù)只，摘眼球后取血于涂有肝素的小試管內(nèi)，取離心后的上層血漿250μL于10mL具塞試管內(nèi)，分別加入6.32mg/mL的蒿甲醚甲醇

6、溶液20μL,63.2mg/mL的蒿甲醚甲醇溶液5μL,15μL。渦旋3min，再加入5mL甲基叔丁基醚渦旋3min,3500r/min下離心3min后取上清液3mL，氮氣吹干，用甲醇150μL溶解，進樣20μL，記錄峰面積。2.3方法專屬性從圖2可見，蒿甲醚與蒿乙醚的出峰時間分別為6.5min和8.28min,兩種物質(zhì)的出峰時間相近，并且都能在10min之前出峰，分離度良好（R=6.14）。2.4血漿中蒿甲醚含量測定標準曲線的制備取3份250μL小鼠血漿，分別加入6.32mg/mL蒿甲醚甲醇溶液10、20、30、40μL和63.2mg

7、/mL蒿甲醚甲醇溶液15μL，15.82mg/mL的內(nèi)標蒿乙醚20μL，以蒿甲醚與蒿乙醚峰面積的比值為橫坐標，蒿甲醚在小鼠血漿中的濃度為縱坐標作圖得內(nèi)標法的線性關系曲線，y=243.44x+4.152，R2=0.9991，線性范圍0～3.792mg/mL。A.甲醇溶液中蒿甲醚(ARM)與蒿乙醚(ARE)的色譜圖B.提取后的空白血漿色譜圖C.提取后的空白血漿中添加蒿甲醚與蒿乙醚后的色譜圖D.甲醇溶液中青蒿素(QHS)與蒿甲醚的色譜圖圖2高效液相色譜圖（略）Fig.2HPLCchromatograms2.5提取回收率按“2.1.2”項下處理

8、血漿樣品后，高、中、低3個濃度的蒿甲醚在小鼠血漿中的提取回收率(n=3)分別為(84.8±1.6)%，(83.5±1.1)%，(73.0±2.9)%。2.6方法回收率分別量取250μL小鼠血漿，精密加入6.