針刺對乳腺增生模型大鼠雌激素、雌激素受體及其信號傳導(dǎo)的干預(yù)作用

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1、針刺對乳腺增生模型大鼠雌激素、雌激素受體及其信號傳導(dǎo)的干預(yù)作用【摘要】【目的】觀察針刺對雌激素介導(dǎo)的乳腺增生模型大鼠的影響?！痉椒ā窟x用SD雌性未孕大鼠，隨機分為4組：正常組、模型組、針刺組(電針膻中、三陰交穴)、西藥組(灌胃三苯氧胺05mg·kg-1·d-1);除正常組外，其他組均采用肌注己烯雌酚(劑量為05mg·kg-1·d-1)及黃體酮(劑量為4mg·kg-1·d-1)方法復(fù)制乳腺增生模型;造模成功后針刺組及西藥組治療30d，采集標本，檢測各組大鼠體質(zhì)量，第2對乳頭高度，血清雌激

2、素(E2)水平，雌激素受體(ER)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表達及乳腺組織形態(tài)學(xué)變化?！窘Y(jié)果】各組大鼠治療前后體質(zhì)量、治療前乳頭高度差異無顯著性意義(均P>005)，治療后模型組乳頭高度顯著增加(P﹤001)，各治療組可顯著降低乳頭高度(均P﹤005);模型組出現(xiàn)明顯乳腺增生形態(tài)學(xué)改變，各治療組可顯著減少乳腺小葉腺泡數(shù)、腺泡腔直徑及導(dǎo)管直徑(均P﹤005或P﹤001);模型組大鼠血清E2水平，乳腺組織ER、ERK、eNOS蛋白表達陽性細胞數(shù)顯著增加(均P﹤001)，各

3、治療組可顯著降低上述指標(P﹤005或P﹤001)?！窘Y(jié)論】針刺治療乳腺增生的作用可能與其能調(diào)節(jié)雌激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，抑制雌激素的促乳腺增生效應(yīng)有關(guān)。【關(guān)鍵詞】乳腺增生/針灸療法;　雌激素/血液;　乳腺/病理學(xué);　信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路;　疾病模型，動物;　大鼠雌激素作為一種重要的女性激素，在乳腺的生理病理過程中有著十分重要的作用。乳腺增生具有明顯的雌激素依賴性。雌激素能刺激乳腺組織增生，引起乳腺導(dǎo)管擴張和囊腫形成，是影響乳腺增生發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸的重要因素[1-2]。雌激素通過靶組織中的雌激素受體發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，在這一過程中雌

4、激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制起著關(guān)鍵性的作用[3]。本實驗觀察了針刺對雌激素介導(dǎo)的乳腺增生模型大鼠雌激素(E2)水平，雌激素受體(ER)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達的影響?，F(xiàn)報道如下。　　1　材料與方法　　11　實驗動物　選用清潔級SD雌性未孕健康大鼠40只，體質(zhì)量220~240g，鼠齡3個月，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SCXK(粵)20030001。飼養(yǎng)環(huán)境：廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供的清潔級動物實驗房，動物實驗設(shè)施使用編號：0005042。　　12

5、　藥物和試劑與儀器　己烯雌酚注射液(廣州明興制藥廠生產(chǎn)，批號：103149);黃體酮注射液(上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號：H31021401);三苯氧胺(TAM，上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：H10910072);蘇木素(廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號：20050918);伊紅(南京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號：20051809);E2試劑盒由北京東雅生物技術(shù)有限公司提供(批號：20050625)，檢測儀器為上海日環(huán)儀器一廠SN695B型放免測量儀;ER、ERK、eNOS抗體及免疫組化試劑盒購自中山生物試劑有限公司廣州分公司，ER、E

6、RK、eNOS一抗工作濃度為1∶100;二抗、三抗、聯(lián)苯二胺(DAB)工作液購自武漢博士德公司;日本Olympus顯微鏡;北京航空航天大學(xué)圖像分析軟件(24版本)。　　13　造模方法[4]　大鼠大腿內(nèi)側(cè)肌注己烯雌酚注射液05mg·kg-1·d-1，連續(xù)25d，繼而改用肌注黃體酮4mg·kg-1·d-1，連續(xù)5d。　　14　分組　40只大鼠隨機選取10只作為正常組，其他30只造模成功后隨機分為模型組、針刺組和西藥組。正常組在實驗的后半段以蒸餾水灌胃2mL/d;模型組造模成功后

7、以蒸餾水灌胃，針刺組造模成功后進行針刺治療，西藥組造模成功后灌胃三苯氧胺05mg·kg-1·d-1，均30d。　　15　針刺方法　取穴：膻中、三陰交穴。參照《實驗針灸學(xué)》[5]，膻中定位：胸骨正中線上平第4~5肋間隙;三陰交定位：后肢內(nèi)踝尖直上10mm處。刺法：以1寸毫針，斜刺膻中穴，留針15min;直刺雙側(cè)三陰交穴，加電，疏密波，強度以肌肉輕微抖動為度，時間持續(xù)15min，每天1次，共30d。　　16　標本采集及檢測項目　　161　乳頭高度測量　用精密油標卡尺測定治療前后大

8、鼠第2對乳頭高度。　　162　血清E2水平檢測　實驗結(jié)束后斷頭采血，血樣經(jīng)離心(2000г/min×15min)，取血清，低溫保存(-20℃)。采用放射免疫法測定。　　163　組織形態(tài)學(xué)　于實驗結(jié)束后處死動物，取大