阿司匹林對(duì)大鼠脊髓損傷細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用

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1、阿司匹林對(duì)大鼠脊髓損傷細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用作者：王景，夏亞一，李延宏，潘文杰，趙斌【摘要】目的觀察阿司匹林對(duì)大鼠慢性壓迫性脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。方法選擇65只體重為220～250g的adeof65ice(iceintotheaspirintherapygroup(GroupA)，30miceintothenormalsodium(NS)controlgroup(GroupB)and5miceintotheshamoperationgroup(GroupC).Appliedthelootor′sfunctionscaleandtheTU

2、NELimmunohistochemistrytechniquelabeledofthespinalcordinjuringprofileson1st、3rd、7th、14th、28thdaysofpostoperationrespectively.ResultGroupAreducedtheneuronapoptosis，theApoptosisIndex(AI)andtheresultsoflootor′sfunctionscalepareinaldeoxynucheotidetransferasemediateddeoxyuridinebiot

3、innickendlabeling，TUNEL)，觀察阿司匹林對(duì)慢性壓迫性脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。1材料和方法1.1慢性壓迫性脊髓損傷動(dòng)物模型的制作65只體重220～250g的健康g/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉。常規(guī)消毒鋪巾，取后正中切口，切除T10棘突，以平頭鉆行椎板鉆孔，暴露硬膜。用直徑3mm、螺距0.5mm、經(jīng)高壓蒸汽滅菌的不銹鋼平頭螺釘旋入T10椎板，螺釘頭端呈水平面。初次旋入時(shí)螺釘頭面僅與硬脊膜接觸，以旋入過(guò)程中大鼠后肢不出現(xiàn)跳動(dòng)，擠捏大鼠尾根部可引出反應(yīng)，且植入螺釘牢固為度，證明未造成脊髓損傷。以后每隔5d顯露螺釘，將螺釘旋入1/2圈約0.2

4、5mm，造成大鼠脊髓漸進(jìn)性壓迫性損傷，于造模后第1、3、7、14、28d取材觀察。1.2試劑配置阿司匹林0.18g加入50mL雙次蒸餾水，配成濃度為20mmol/L的懸浮液，現(xiàn)用現(xiàn)配。1.3動(dòng)物分組將上述65只大鼠隨機(jī)分組：慢性脊髓壓迫阿司匹林治療組(A組，30只)，慢性脊髓壓迫生理鹽水對(duì)照組(B組，30只)，假手術(shù)組(C組，5只，僅行椎板鉆孔術(shù))。模型制作完成10min后，A組腹腔注射阿司匹林(30mg/kg)，此后每隔5d同途徑同劑量再次注射；B組腹腔注射等量的生理鹽水。A、B組分別于壓迫過(guò)程中第1、3、7、14、28天取材，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只動(dòng)物。

5、1.4行為學(xué)檢查慢性壓迫性脊髓損傷后1、3、7、14、28d對(duì)動(dòng)物進(jìn)行行為學(xué)檢查，采用改良的Tarlov評(píng)分［1］和斜板試驗(yàn)［2］。1.5病理標(biāo)本制備分別于不同時(shí)間點(diǎn)取材［3］，采用TUNEL觀察各組細(xì)胞凋亡率。TUNEL檢測(cè)凋亡試劑盒為武漢博士德產(chǎn)品，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書步驟操作。1.6圖像分析各組各時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)計(jì)數(shù)6張切片(損傷段、損傷上段、損傷下段各2張)，經(jīng)計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)處理，分別測(cè)出每張切片凋亡細(xì)胞指數(shù)(AI)及每mm2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果判定以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞。采用高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)，進(jìn)行圖像半定量分析。應(yīng)

6、用凋亡細(xì)胞核數(shù)估計(jì)凋亡細(xì)胞，根據(jù)下列公式計(jì)算：AI＝凋亡細(xì)胞核數(shù)/總細(xì)胞核數(shù)。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)行多樣本均數(shù)單因素方差分析或兩樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)，以±s表示，以α＝0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)進(jìn)行雙側(cè)檢驗(yàn)。使用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果2.1行為學(xué)檢查采用改良的Tarlov評(píng)分和斜板試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，慢性壓迫性脊髓損傷后60只大鼠均出現(xiàn)不同程度后肢癱瘓，排尿障礙。A組運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)良好，尿潴留有所緩解，與B組比較差異有顯著性差異(P＜0.05)(見(jiàn)表1)。表1大鼠慢性壓迫性脊髓損傷Tarlov評(píng)分和斜板試驗(yàn)結(jié)果2.2各組細(xì)胞凋亡指數(shù)及凋亡率通過(guò)

7、對(duì)組織染色切片的圖像分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，A組的細(xì)胞凋亡指數(shù)和凋亡率均小于B組(P＜0.05)(見(jiàn)表2～3)。表2大鼠慢性壓迫性脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)結(jié)果2.3病理學(xué)檢查光鏡下觀察B組切片，可見(jiàn)神經(jīng)元細(xì)胞水腫，喪失典型的多極形態(tài)。胞核偏位，尼氏小體喪失，噬神經(jīng)元現(xiàn)象明顯。軸突纖維排列結(jié)構(gòu)紊亂，髓鞘脫失，星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞增生，有衛(wèi)星現(xiàn)象。部分神經(jīng)元細(xì)胞縮小呈三角形，胞核濃縮深染，呈缺血性改變，亦可見(jiàn)明顯灶性表3大鼠慢性壓迫性脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡率結(jié)果出血壞死區(qū)及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。A組切片可見(jiàn)脊髓灰質(zhì)輕度水腫，神經(jīng)元腫脹減輕，有少量膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)

8、細(xì)胞增生，白質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，可見(jiàn)病理改變較B組有所減輕(見(jiàn)圖1～4)。3討論