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《益母草總黃酮的提取及其對(duì)羥自由基的清除作用論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、益母草總黃酮的提取及其對(duì)羥自由基的清除作用論文.freelg/ml，回收率為101.6%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過(guò)程.freelakefulluseoftheresourcesofLeonurusandavoidLeonurusanditsdifferentiatingandtheeffectonscavengingofhydroxylradicals.MethodsTheflavonesLeonurusethod.Aspectrophotometryg/mlandtherateofrecoveryethodstoobtainhighquantityandpurity
2、ofextractsfromLeonurus.Thismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanypollution.Itisanidealleonurushaseffectsonscavengingofhydroxylradicals.Keyl95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾。濾渣再加80ml95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25ml左右為止，放置250ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2測(cè)定方法依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定益母草中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮化
3、合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見(jiàn)光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3定量實(shí)驗(yàn)—總黃酮的含量測(cè)定2.3.1波長(zhǎng)的選擇取樣品液適量，在0.30ml5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420～700nm波長(zhǎng)范圍測(cè)定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故測(cè)定時(shí)選用此波長(zhǎng)。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制分別精密吸取蘆丁對(duì)照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4
4、%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白，于510nm處測(cè)吸光度。吸光度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表1紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定吸光度（略）根據(jù)上表得回歸方程：=-0.0311+13.5184X，r=0.99992.3.3提取物含量的測(cè)定精密吸取樣品液0.50ml，置10ml容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備方法測(cè)定吸光度=0.246，根據(jù)回歸方程：=-0.0311+13.5184X，計(jì)算樣品中總黃酮的含量X=0.4099mg/ml。2.3.4回收實(shí)驗(yàn)精密量取樣品液2.00ml，加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品2.00ml（0.10mg/ml），同前樣品測(cè)定方法操作測(cè)定吸光度，
5、求出回收率為101.6%。2.4定性實(shí)驗(yàn)—總黃酮的鑒別2.4.1顏色反應(yīng)紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見(jiàn)光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?.5min，立即在紫外光下觀(guān)察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加１％三氯化鋁乙醇溶液，吹干，在可見(jiàn)光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)。乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。鹽酸—鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。2.4.2紙層析
6、取樣品溶液10μl點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5(體積比)為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見(jiàn)熒光斑點(diǎn)。2.5總黃酮提取物對(duì)·OH的清除作用參照Fenton反應(yīng)的方法建立反應(yīng)體系模型［5］，利用H2O2與Fe2+混合產(chǎn)生·OH，但由于·OH具有很高的反應(yīng)活性，存活時(shí)間短，若在反應(yīng)體系中加入水楊酸，就能有效地捕捉·OH，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。反應(yīng)式如下：H2O2+Fe2+→Fe3++·OH+OH-2·OH+COOHOH→COOHOHOH+H2O(無(wú)色)(有色)該產(chǎn)物在510nm處有強(qiáng)吸收，若在此反應(yīng)體系中加入具有清除·OH功能的被測(cè)物，便會(huì)
7、與水楊酸競(jìng)爭(zhēng)·OH，從而使有色產(chǎn)物生成量減少，采用固定反應(yīng)時(shí)間法，在相同體積的反應(yīng)體系(8.8mmol/LH2O21ml，9mmol/LFe2+1ml，9mmol/L1ml水楊酸—乙醇溶液)加入一系列不同濃度的益母草總黃酮提取液，并以蒸餾水為參比，與試劑空白液比較，在510nm處測(cè)量各濃度下的吸光度，便能測(cè)定被測(cè)物(總黃酮)對(duì)·OH的清除作用，其清除率計(jì)算公式：清除率(％)=Y0-YxY0×100%以實(shí)驗(yàn)的提取液總黃酮作為樣品，分別取不同體積的
