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《達(dá)肝清對(duì)小鼠肝細(xì)胞異常凋亡的影響論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、達(dá)肝清對(duì)小鼠肝細(xì)胞異常凋亡的影響論文【摘要】目的探討中藥復(fù)方達(dá)肝清對(duì)苯巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞異常凋亡的影響，進(jìn)一步揭示其抗肝損傷的作用機(jī)理。方法采用撤除苯巴比妥鈉（PB）誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞凋亡的模型；通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)，TUNEL原位檢測(cè)法，HE常規(guī)染色等方法，以肝細(xì)胞凋亡率、肝組織形態(tài)、原位細(xì)胞TUNEL反應(yīng)、肝/體重比為指標(biāo)，觀察不同劑量達(dá)肝清對(duì)PB誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果流式細(xì)胞儀分析表明，達(dá)肝清高、中劑量組肝細(xì)胞凋亡率明顯低于凋亡對(duì)照組；達(dá)肝清高劑量組肝/體重比回落明顯低于凋亡對(duì)照組；組織學(xué)染色及TUNEL反應(yīng)，凋亡對(duì)照組可見凋亡小體.freelice,andtoresearcht
2、hemechanismofitspreventingacuteliverinjury.MethodsTheapoptosismodeloflivercellsinmicecausedbyphenobarbitaledtocheckthechangesinapoptoticcells.Therateofhepatocyteapoptosis,thehepatichistopathologicchanges,tunnelchangeandliverbodyetryanalysisrevealedthattheapoptoticrateoflivercellsandliverbodyiddledo
3、segroupsoreconspicuous,andthenumberofapoptoticcelloreinpositivegroupthanothergroups.ConclusionChineseherbpoundDaganqinginthedosagesof34g/kg，17g/kgcanobviouslyinhibitthelivercellapoptosiscausedbyphenobarbitalaybeoneofthemechanismsofDaganqingpreventingacuteliverinjury.Keya公司）,TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（德國(guó)RocheAp
4、pliedScience公司），其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。1.4儀器顯微鏡（德國(guó)Leica公司），TGL-16M低溫超速離心機(jī)（湖南塞特湘儀有限公司），EL204電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司），HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司),EPICSXL型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BeckmanCoulter公司）。2方法2.1動(dòng)物分組及處理小鼠60只，雌雄各半，共分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組,非凋亡對(duì)照組，凋亡對(duì)照組，達(dá)肝清高劑量組(34g/kg)，達(dá)肝清中劑量組(17g/kg)，達(dá)肝清低劑量組(8.5g/kg)?？瞻讓?duì)照組ip無(wú)菌生理鹽水，0.15ml/10g，1次/d，連續(xù)7d
5、；非凋亡對(duì)照組ip0.5%PB，0.8mg/10g，0.15ml/10g，1次/d，連續(xù)7d；凋亡對(duì)照組ip0.5%PB,0.8mg/10g,0.15ml/10g，1次/d，連續(xù)6d。其余各藥物組，首先ip0.5%PB，0.8mg/10g，0.15ml/10g，1次/d，連續(xù)6d。從撤除PB開始灌胃給藥，0.2ml/10g，1次/6h，至停PB后36h。將所有小鼠脫頸處死，取肝組織。2.2流式細(xì)胞儀分析取小鼠肝組織，分離肝細(xì)胞，用PBS洗滌細(xì)胞1次（離心2000r/min，5min）收集并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/ml；細(xì)胞加9倍體積的70%冰乙醇,于-20℃固定至少12h；離心收集細(xì)胞后，
6、用PBS洗細(xì)胞以除去乙醇，細(xì)胞重懸于500μlPBS中；加入RNaseA，使其終濃度為0.25mg/ml,37℃,反應(yīng)30min；加入5μlPI室溫避光染色30min；流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率。2.3肝/體重比及組織學(xué)染色取小鼠全部肝組織,沾除血漬,測(cè)肝重,計(jì)算肝/體質(zhì)量比。取肝組織,中性福爾馬林固定,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下觀察，高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，觀察其形態(tài)學(xué)變化，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞。2.4TUNEL反應(yīng)按照RocheAppliedScience公司TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作步驟進(jìn)行，光鏡下觀察，高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞。2.5
7、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以±s表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3結(jié)果3.1流式細(xì)胞儀分析凋亡率流式細(xì)胞儀分析表明（見表1），凋亡對(duì)照組凋亡率明顯高于空白對(duì)照組及非凋亡對(duì)照組（P＜0.01）；與凋亡對(duì)照組比較，達(dá)肝清高、中劑量組肝細(xì)胞凋亡率有顯著差異（P＜0.01），達(dá)肝清低劑量組肝細(xì)胞凋亡率雖低于凋亡對(duì)照組但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。表1流式細(xì)胞
