達(dá)肝清對小鼠肝細(xì)胞異常凋亡的影響的論文

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1、達(dá)肝清對小鼠肝細(xì)胞異常凋亡的影響的論文【摘要】目的探討中藥復(fù)方達(dá)肝清對苯巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞異常凋亡的影響,進(jìn)一步揭示其抗肝損傷的作用機(jī)理。方法采用撤除苯巴比妥鈉(pb)誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞凋亡的模型;通過流式細(xì)胞檢測技術(shù),tunel原位檢測法,he常規(guī)染色等方法,以肝細(xì)胞凋亡率、肝組織形態(tài)、原位細(xì)胞tunel反應(yīng)、肝/體重比為指標(biāo),觀察不同劑量達(dá)肝清對pb誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果流式細(xì)胞儀分析表明,達(dá)肝清高、中劑量組肝細(xì)胞凋亡率明顯低于凋亡對照組;達(dá)肝清高劑量組肝/體重比回落明顯低于凋亡對照組;組織學(xué)染色及tunel反應(yīng),凋亡對照組可見凋亡小體,凋亡現(xiàn)象明顯,凋亡細(xì)胞明顯多于達(dá)肝清高、中劑量

2、組。結(jié)論達(dá)肝清能明顯抑制苯巴比妥鈉誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡,進(jìn)一步提示抑制肝細(xì)胞異常凋亡可能為其抗肝損傷的機(jī)理之一?!娟P(guān)鍵詞】達(dá)肝清;肝細(xì)胞凋亡;流式細(xì)胞術(shù);原位末端缺口標(biāo)記    abstract:objectivetostudytheeffectsofchineseherbpounddaganqingonapoptosiscausedbyphenobarbitalice,andtoresearchthemechanismofitspreventingacuteliverinjury.methodstheapoptosismodeloflivercellsinmicecausedbyphenobar

3、bital,tunel,andheroutinedye,edtocheckthechangesinapoptoticcells.therateofhepatocyteapoptosis,thehepatichistopathologicchanges,tunnelchangeandliverbodyetryanalysisrevealedthattheapoptoticrateoflivercellsandliverbodyiddledosegroupsoreconspicuous,andthenumberofapoptoticcelloreinpositivegroupthanothergr

4、oups.conclusionchineseherbpounddaganqinginthedosagesof34g/kg,17g/kgcanobviouslyinhibitthelivercellapoptosiscausedbyphenobarbitalaybeoneofthemechanismsofdaganqingpreventingacuteliverinjury.  key;tunel  達(dá)肝清是由三姐妹、黃根等藥物組成的中藥復(fù)方,具有清熱解毒、益氣健脾、利濕化瘀等功效,臨床上主要用于治療急、慢性病毒性肝炎,療效顯著。.研究已表明達(dá)肝清具有保肝降酶,抗乙肝病毒等作用[1],對急、慢性

5、肝損傷具有明顯的保護(hù)作用[2],同時對2215細(xì)胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(hbsag)和e抗原(hbeag)有抑制作用[3]。本實(shí)驗(yàn)采用撤除苯巴比妥鈉誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡模型,觀察達(dá)肝清對肝細(xì)胞異常凋亡的影響,以進(jìn)一步揭示其治療病毒性肝炎的作用機(jī)理。  1材料  1.1動物  km小鼠,spf級,體質(zhì)量(20±2.0)g,雌雄各半,廣西壯族自治區(qū)藥品檢驗(yàn)所提供,許可證號:scxk桂2003-0003?! ?.2藥液制備  達(dá)肝清由三姐妹、黃根等藥物組成(飲片由廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院蔡毅教授鑒定),經(jīng)水提醇沉,濾液濃縮成浸膏,低溫貯藏,用時用水稀釋。  1.3試劑  注射用苯巴比妥鈉(上海新亞藥業(yè)公司

6、),細(xì)胞凋亡pi熒光檢測試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司),rnasea(美國sigma公司),tunel細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(德國rocheappliedscience公司),其余試劑均為國產(chǎn)分析純。  1.4儀器  顯微鏡(德國leica公司),tgl-16m低溫超速離心機(jī)(湖南塞特湘儀有限公司),el204電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司),hh-8數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司),epicsxl型流式細(xì)胞儀(美國beckmancoulter公司)?! ?方法  2.1動物分組及處理  小鼠60只,雌雄各半,共分為6組,每組10只,分別為空白對照組,非凋亡對照組,凋亡對照組,

7、達(dá)肝清高劑量組(34g/kg),達(dá)肝清中劑量組(17g/kg),達(dá)肝清低劑量組(8.5g/kg)??瞻讓φ战Mip無菌生理鹽水,0.15ml/10g,1次/d,連續(xù)7d;非凋亡對照組ip0.5%pb,0.8mg/10g,0.15ml/10g,1次/d,連續(xù)7d;凋亡對照組ip0.5%pb,0.8mg/10g,0.15ml/10g,1次/d,連續(xù)6d。其余各藥物組,首先ip0.5%pb,0.8mg/1

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