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1、二氮嗪預(yù)處理對(duì)肝硬化大鼠肝臟的保護(hù)作用作者：史衛(wèi)海，孫亞偉，徐學(xué)忠，戎亞雄，李文美【摘要】目的探討采用線粒體ATP敏感性鉀通道(mitoKATP通道)選擇性開放劑二氮嗪(DE)進(jìn)行預(yù)處理能否模擬缺血預(yù)處理(IP)對(duì)硬化肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。方法雄性肝硬化SD大鼠隨機(jī)分為5組(每組8只)。IP組以肝缺血5min作預(yù)處理；DE組以靜脈注射DE作為預(yù)處理；DE+5-HD組是在DE組基礎(chǔ)上再予靜注mitoKATP通道選擇性阻滯劑5-hydroxydecanoate(5-HD)進(jìn)行預(yù)處理;對(duì)照組(C組)
2、以靜注等量生理鹽水作為預(yù)處理;上述4組均在預(yù)處理后行肝缺血45min再灌注60min;缺血方式均為70%肝臟熱缺血。假手術(shù)組（S組）僅行開腹，不作任何其他處理。完成預(yù)定實(shí)驗(yàn)操作后分別取血用于血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)與乳酸脫氫酶(LDH)檢測，切取肝組織用于測定ATP酶活力、濕重/干重(ethodsMaleSDratslydividedintofivegroups(n=8ineachgroup).Pretreatmentiafor5minentg/kgintravenouslyinjectionentitoKATPcha
3、nnelsinhibitor5-hydroxydecanoate(5-HD)baseduponDEgroupentalsalineinequalvolumeasacontrolgroup（Cgroup）.Thefourgroupsmentioned-aboveiafor45minafterpretreatment,then,50minutesreperfusionedonthem.Allofratsischemia.Theadditionalfifthgroupofratsoperation(Sgroup)，inonl
4、yanesthesiaandlaparotomyedeasures.Bloodandlivertissueinethebiochemistrylevelsandobservepathologicalchanges.ResultsTheactivitiesofALT，LDH，ATPaseandthelevelsofg2+-ATP酶及Ca2+Mg2+-ATP酶活性。1.4.3肝水腫評(píng)價(jià)切除肝左葉，稱量濕重(×0.5cm×0.2cm組織塊，10%中性甲醛固定，制成石蠟包塊，切片，蘇木素-伊紅染色，光鏡觀察顯微結(jié)構(gòu)變化。切取S
5、組、C組、IP組、DE組大鼠肝左葉約1mm×1mm×1mm組織塊，4%戊二醛固定。取材完成后同批進(jìn)行以下處理：鋨酸后固定2h；乙醇丙酮依次梯度脫水，每級(jí)10min；丙酮環(huán)氧樹脂混合液浸泡;純環(huán)氧樹脂包埋液浸泡3h；環(huán)氧樹脂液包埋聚合成塊；修塊，超薄切片；鉛鈾雙重染色，透射電鏡觀察。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法結(jié)果以x±s表示，用SPSS11.5forWindo.3討論Murry等[1]在對(duì)狗心臟進(jìn)行交替5min的缺血與5min的再灌注4次后，再使心臟經(jīng)受一次40min的缺血與4d的再灌注，結(jié)果顯示經(jīng)預(yù)先短暫缺血處理的心肌壞死面積相
6、對(duì)于未作此處理的可減少75%，遂將此方法稱為缺血預(yù)處理(IP)。近年的研究表明IP對(duì)心臟以外許多器官的I/R損傷同樣具有保護(hù)效應(yīng)，即IP現(xiàn)象具有器官的普遍性。已有研究報(bào)道IP對(duì)正常與肝硬化肝臟的I/R損傷均具有明顯的保護(hù)作用[5-6]。IP效應(yīng)是機(jī)體對(duì)I/R損傷的一種內(nèi)源性調(diào)控保護(hù)作用，其發(fā)生機(jī)制目前尚不十分清楚。近年的研究顯示，mitoKATP通道的開放可能在心肌的IP效應(yīng)中起重要作用，使用DE進(jìn)行預(yù)處理可模擬出與IP相似的保護(hù)作用。藥理學(xué)研究已發(fā)現(xiàn)肝臟與心肌組織中mitoKATP通道數(shù)量相近，且該通道在肝臟與心臟無
7、明顯藥理性差異[7]。但mitoKATP通道在肝硬化肝臟IP效應(yīng)中是否具有與在心臟中相似的作用，使用mitoKATP通道選擇性開放劑DE在肝硬化肝臟能否同樣模擬出IP的保護(hù)作用？目前尚未見這方面的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:IP對(duì)大鼠硬化肝臟的I/R損傷具有明顯的保護(hù)作用，具體表現(xiàn)在反映肝細(xì)胞損害的血清酶指標(biāo)（AST，LDH）和肝組織學(xué)結(jié)構(gòu)損傷較對(duì)照組均明顯改善。使用DE進(jìn)行藥物預(yù)處理可模擬出與IP相似保護(hù)作用，而使用特異性的mitoKATP通道阻滯劑5-HD又可阻斷DE預(yù)處理的這種保護(hù)效應(yīng)，表明mitoKATP通道的開
8、放可能參與了IP作用[5]。mitoKATP通道的開放是通過何種途徑介導(dǎo)了IP保護(hù)作用，其具體的發(fā)生機(jī)制目前還不很明確。通過對(duì)心肌的實(shí)驗(yàn)研究，有報(bào)道認(rèn)為可能有以下的幾種作用途徑：①使得線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔發(fā)生變化，加速釋放I/R引起的線粒體內(nèi)過多的Ca2+和（或）減少Ca2+的進(jìn)入，減輕I/R時(shí)線粒體的Ca2+超載；②使得線粒體基質(zhì)
