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《畢業(yè)論文-重組表達質(zhì)粒ppic9k-msbd-1的構(gòu)建》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、本科畢業(yè)論文重組表達質(zhì)粒pPIC9K-mSBD-1的構(gòu)建There-constructionofpPIC9K-mSBD-1學(xué)院：獸醫(yī)學(xué)院專業(yè)：動植物檢疫姓名：鄭佳琪學(xué)號：090115052指導(dǎo)教師：曹貴方職稱：教授論文提交日期：二Ο一三年六月摘要研究發(fā)現(xiàn)，β-防御素主要由哺乳動物的皮膚、黏膜等上皮細胞產(chǎn)生，由38～42個氨基酸組成。其分子中帶有較多正電荷，空間結(jié)構(gòu)分為疏水區(qū)和帶點區(qū)；折疊形成3束β-折疊片層結(jié)構(gòu)，由6個保守的半胱氨酸殘基形成3個二硫鍵穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，由Cysl-Cys5、Cys2-Cys4、Cys3-Cys6相配對連接。二硫鍵可使小分子防御素緊密聯(lián)結(jié)以防御蛋白酶水解，所以在富
2、含蛋白的吞噬溶酶體環(huán)境中仍保持其特性。這也是防御素區(qū)別于其他抗微生物肽的主要因素。因其抗菌譜廣且抗菌效率高，作用機制獨特，不易產(chǎn)生抗性等特點，在抗生素抗藥性日趨嚴重的情況下，抗菌肽極有可能成為新的抗生藥物的來源。本實驗基于實驗室已經(jīng)構(gòu)建好的質(zhì)粒PUC57-mSBD-1-T，利用PCR技術(shù)，擴增綿羊β-防御素1成熟肽（mSBD-1）基因。擴增出的mSBD-1因與T載體成功連接后，將其亞克隆到畢赤酵母表達載pPIC9K上，構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pPIC9K-mSBD-1。關(guān)鍵詞：防御素畢赤酵母pPIC9K質(zhì)粒There-constructionofpPIC9K-mSBD-1AbstractIt’
3、sfoundthatβ-defensinsismainlycomposedofmammalianskinandmucousmembraneepithelialcells,composedof38~42aminoacids.Becauseoftheirbroad-spectrumofantinicrobialactivityanddefenseagainstpositiveandnegativeGrams'bacteria,epiphyte,protozoanandenvelopedvirus,inadditionalβ-defensinshavedistinctiveantibacte
4、rialmechanism,andhardlyno-endurancetodrug,sotheresearchonβ-defensinshasbecomeahotspotintheworld.ThisexperimenbasesonthelaboratoryplasmidPUC57-mSBD-1-Twhichhasbeenbuilt,usingthePCRtechnologytoamplificatesheepmSBD-1gene.WiththeamplificatedmSBD-1andTcarriersuccessfullyconnected,puttheclonetocarryon
5、pPIC9Kpichiaexpression.SoeukaryoticexpressionplasmidpPIC9K-mSBD-1isbuilt.KeyWords:defensinsPichia.pastorisplasmidpPIC9K目錄1引言11.1動物防御素的概述11.2β-防御素11.3防御素的應(yīng)用前景21.4畢赤酵母表達的優(yōu)點21.5選取質(zhì)粒pPIC9K的優(yōu)點31.6研究內(nèi)容31.7存在的問題32材料與方法42.1材料42.2方法42.2.1綿羊β-防御素1成熟肽（mSBD-1）基因的克隆42.2.2pPIC9K-mSBD-1成熟肽重組質(zhì)粒的構(gòu)建73結(jié)果93.1mSBD-1
6、基因的克隆與測序93.2pPIC9K-mSBD-1成熟肽重組質(zhì)粒的構(gòu)建103.2.1目的片段與表達載體的雙酶切結(jié)果103.2.2菌落PCR篩選陽性克隆結(jié)果113.2.3pPIC9K-mSBD-1測序結(jié)果114討論125結(jié)語12致謝13參考文獻14內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文131引言1.1動物防御素的概述在動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一組具有抗菌作用的多肽,稱之為抗菌肽。它們參與了抵抗微生物侵害的最初宿主防御活動,是內(nèi)源免疫體系成分。目前已經(jīng)從動物和植物中分離純化出200種以上的多肽?？咕氖且环N分子量少于100個氨基酸殘基的多肽，它主要兩大家族組成，防御素（defensins）和cathelicid
7、ins，它們廣泛存在于哺乳動物的潘氏細胞和巨噬細胞內(nèi)。20世紀80年代中期,Ganz研究組在研究吞噬細胞非依賴氧殺菌機制過程中，兔和人中性粒細胞胞漿顆粒中發(fā)現(xiàn)一系列一級結(jié)構(gòu)相似的小分子陽離子肽,由于其廣譜的抗微生物活性而首次以防御素一詞作為這類肽的命名[1,2]。動物防御素是富含精氨酸殘基的陽離子多肽,成熟肽形式其分子量3.5～6kDa,通常含有六個保守的半胱氨酸殘基[3]，在動物體內(nèi)以一種含有β-折疊和6個半胱氨酸形成的3對二硫鍵框架的抗菌肽
