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1、脂聯(lián)素對人臍靜脈內(nèi)皮細胞CD55和CD59表達的影響【摘要】目的觀察脂聯(lián)素對人臍靜脈內(nèi)皮細胞補體調(diào)節(jié)蛋白CD55和CD59表達的影響。方法體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞；分為空白對照組、C反應(yīng)蛋白（CRP）組和脂聯(lián)素組，人臍靜脈內(nèi)皮細胞分別與50μg/ml的CRP和25μg/ml的脂聯(lián)素共同孵育48h，流式細胞儀檢測CD55和CD59的表達。結(jié)果CRP刺激后CD55平均熒光強度、CD59平均熒光強度和CD55陽性百分率較空白對照組升高（3.84±0.21比2.81±0.06，P＜0.001；69.72±4.48比51.15±7.86，P＜0.01；98.30
2、±1.13比93.57±1.18，P＜0.001)；脂聯(lián)素刺激后CD59平均熒光強度和CD55陽性百分率較空白對照組升高（63.02±4.90比51.15±7.86，P＜0.05；96.55±0.66比93.57±1.18，P＜0.01）。結(jié)論脂聯(lián)素是人臍靜脈內(nèi)皮細胞CD55和CD59表達的上調(diào)因素，并可能通過上調(diào)內(nèi)皮細胞CD55和CD59的表達發(fā)揮抗炎、抗動脈粥樣硬化作用?！娟P(guān)鍵詞】脂聯(lián)素；補體調(diào)節(jié)蛋白；動脈粥樣硬化脂聯(lián)素是脂肪細胞分泌的特異性脂肪細胞因子，有調(diào)解糖脂代謝及抗動脈粥樣硬化特性。C反應(yīng)蛋白(CRP)可激活補體經(jīng)典路徑并有促動脈粥樣硬化作
3、用。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)高脂血癥患者外周血淋巴細胞CD55、CD59表達下調(diào)〔1〕；CD55陽性淋巴細胞平均熒光強度與腰圍、腰臀比和CRP負相關(guān)〔2〕，與脂聯(lián)素正相關(guān)〔3〕，這提示脂肪細胞因子和炎癥狀態(tài)很可能影響補體調(diào)節(jié)蛋白表達。本研究通過體外實驗揭示CRP和脂聯(lián)素對人臍靜脈內(nèi)皮細胞株（humanumbilicalvEinendothelialcells,HUVECs）補體調(diào)節(jié)蛋白表達的影響，探討補體調(diào)節(jié)蛋白表達的調(diào)節(jié)機制及脂聯(lián)素抗動脈粥樣硬化的新機制。 1材料與方法 1.1材料 HUVECs購自中南大學(xué)湘雅細胞庫；重組人脂聯(lián)素球形結(jié)構(gòu)域購自Biove
4、ndor公司；CRP購自Chemicon公司；胎牛血清購自杭州四季青公司；RPMI1640購自Gibco公司；胰酶購自Sigma公司；流式細胞儀為美國Coulter.EPICS.XL；PE標記的CD55單抗購自Ebioscience公司，批號為E025933；PE標記的CD59單抗購自Caltag公司,批號為1380842C。 1.2方法 1.2.1細胞培養(yǎng) HUVECs培養(yǎng)于含10%胎牛血清和1%雙抗的RPMI1640培養(yǎng)液，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每天換液一次，每2～3天用0.25%的胰酶消化傳代。生長至85%融合時用0.25%胰酶
5、消化、細胞計數(shù)板計數(shù)后均勻接種于24孔細胞培養(yǎng)板備用，接種細胞密度為5×104個/ml?！ ?.2.2CRP對HUVECsCD55和CD59表達的影響 ?、賹嶒灧纸M：待細胞貼壁后改用含8%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后棄去培養(yǎng)液；按照隨機化原則CRP組重復(fù)5孔，空白對照組重復(fù)5孔；根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果CRP組每孔加入濃度為50μg/ml的CRP，用含5%胎牛血清的RPMI1640調(diào)至相同體積；兩組細胞在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后進行流式細胞儀檢測。②HUVECsCD55和CD59表達的檢測：0.25%胰酶消化后吹打成均勻單細胞懸液，1
6、500r/min離心5min，棄去上清；加入PBS液2ml，1500r/min離心5min，棄上清，如此洗滌2次；留取細胞沉淀加入1mlPBS液吹打成均勻單細胞懸液；陰性對照管分別加入鼠抗人IgG1和鼠抗人IgG2a10μl及細胞懸液100μl,標號的樣品管分別加入PE標記的CD55單抗和CD59單抗各10μl及細胞懸液100μl；室溫避光孵育15min后用2mlPBS重懸細胞；流式細胞儀分析5000個細胞，SYSTEMⅡTM軟件分析。 1.2.3脂聯(lián)素對HUVECsCD55和CD59表達的影響 ?、賹嶒灧纸M：待細胞貼壁后改用含8%胎牛血清的RPMI1
7、640培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后棄去培養(yǎng)液；按照隨機化原則脂聯(lián)素組重復(fù)5孔，空白對照組重復(fù)5孔；根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果脂聯(lián)素組每孔加入濃度為25μg/ml的脂聯(lián)素，用含5%胎牛血清的RPMI1640調(diào)至相同體積；兩組細胞在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后進行流式細胞儀檢測。②HUVECsCD55和CD59表達的檢測同上?！ ?.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件，數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較用單因素方差分析。 2結(jié)果 2.1CRP對HUVECsCD55和CD59表達的影響 50μg/ml的CRP孵育48h后，HUVECsCD55百分率和空白對照組比較顯著
8、升高(P＜0.01)；CD59百分率和空白對照組比較統(tǒng)計學(xué)差異無顯著性；CD55
